棉花洞A雄性不育系及保持系花药发育的mRNA差别显示

摘要

植物花粉发育的分子生物学,已经成为植物分子生物学研究中的热点领域.研究花药、花粉在发育过程中基因表达的时空特异性,分离相关的特异基因和特异启动子,以探明植物花粉发育的分子模式,可以更好地控制植物的生殖规律,推动杂种优势向更高层次发展.棉花洞A雄性核不育系是1972年从洞庭一号棉花原种圃中发现的突变体.遗传分析表明,其雄性不育性状受一对隐性基因(msms)控制.细胞学观察发现,花粉的败育发生在小孢子单核早期,表现出败育花药壁绒毡层异常、花粉壁发育不完全、花粉细胞质完全解体等变化.经过二十余年的

目录

一、文献综述

1.1、植物花粉发育的分子生物学研究进展

1.1.1、花药的解剖结构

1.1.2、花药、花粉形成过程中的细胞分化

1.1.3、花粉的发育

1.1.4、花粉发育相关基因的克隆及其表达

1.1.5、花粉发育相关基因的调控

1.1.6、花粉发育的基因工程

1.2、植物花粉发育相关基因克隆方法

1.2.1、功能产物的克隆方法

1.2.2、转座子标签方法

1.2.3、同源序列克隆方法

1.2.4、消减(subtractive)杂交克隆方法

1.2.5、mRNA差别显示法

1.2.6、cDNA-AFLP克隆法

二、引言

三、实验思路

四、材料与方法

4.1、实验材料

4.1.1、棉花(Gossypium Hirsutum L.)无花粉败育材料

4.1.2、主要化学试剂

4.1.3、克隆载体、宿主菌及探针

4.1.4、主要仪器设备

4.1.5、主要缓冲液组成

4.2、实验方法

4.2.1、田间实验

4.2.2、细胞学观察

4.2.3、总RNA提取

4.2.4、mRNA纯化

4.2.5、cDNA合成

4.2.6、cDNA-AFLP分析

4.2.7、差异片段的回收、克隆、测序

4.2.8、组织特异性鉴定

4.2.9、GHA27与基因组的Southern杂交

4.2.10、cDNA片段的3’RACE

4.2.11、相似性分析

五、结果与分析

5.1、棉花花粉发育进程与外部形态指标

5.2、RNA的提取及mRNA纯化

5.3、cDNA-AFLP结果的检测

5.4、棉花花药发育的cDNA-AFLP

5.5、差异片段的回收及再扩增

5.6、组织特异性鉴定

5.7、克隆GHA27、GHA28、GHA47的测序结果及序列分析

5.8、G-HA27的3’RACE分析

5.9、GHA27的同源性比较

5.10、GHA27的Southern杂交

六、讨论

6.1、棉花RNA的提取方法

6.2、棉花花药的cDNA-AFLP与雄性不育

6.3、cDNA-AFLP回收片段的特异性鉴定

6.4、差别显示回收片段的延伸

6.5、棉花ADP-ribosylation factor基因的功能预测

6.6、棉花CDNA-AFLP的进一步研究

七、结论

参考文献

缩略词表

致谢