柑桔果实有机酸代谢生理和奉节脐橙芽变株系的AFLP分析研究

摘要

研究柑桔果实中有机酸的代谢,从生理和分子水平上探索柑桔果实有机酸积累的机制,进而对其调控,具有重要的理论和实践意义.该研究取样以高酸的尤力克柠檬(Citus Limon Burm.F),低酸的冰糖橙(C.Sinensis Osbeck)和中酸的锦橙(C.SinensisOsbeck)为参照,重点研究比较奉节脐橙(C.SinensisOsbeck)72-1及其低酸和晚熟芽变,首次同时比较几个柑橘种和品种的几种与果实有机酸代谢相关的酶活性,测定的有机酸代谢酶包括磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶(Phosphoenolpyruvatecarboxylase,PEPC,EC4.1.1.31);柠檬酸合成酶(Citrate-synthase,CS,EC4.1.3.7),乌头酸酶(AconitaseorAconitatehydratase,EC4.2.1.3),NAD-异柠檬酸脱氢酶(NAD-Isocitratedehydrogenase,NAD-IDH,EC1.1.1.41)和苹果酸脱氢酶(Malatedehydrogenase,MDH,EC 1.1.1.37);并用AFLP方法比较果实有机酸含量发生变异的脐橙芽变及其母系的基因组DNA,筛选出其AFLP特异片段并克隆测序.

目录

主要缩略词表

第一章文献综述

1.1、柑桔果实有机酸代谢研究

1.1.1柑桔果实中有机酸的种类和含量变化

1.1.2有机酸的合成部位和贮藏场所

1.1.3柑桔果实汁胞中有机酸积累的生理机制

1.1.4影响柑桔果实有机酸的环境因素

1.1.5降低柑桔果实酸度的措施

1.2植物生理学研究的进展——遗传标记和基因的表达与调控

1.2.1.遗传标记的类型与分子标记的概念

1.2.2分子标记的种类

1.2.3.AFLP标记

1.2.2基因的表达调控

1.3.柑橘果树有机酸分子生物学研究进展

1.3.1控制柑桔果实有机酸研究代谢的分子标记和基因表达研究进展。

1.3.2砷酸、亚砷酸盐降酸机理

1.3.3有机酸的载体-柠檬酸结合蛋白(CBP，Citrate Binding Protein)和H+-ATP酶的提纯和基因分离

第二章引言

2.1柑橘果实有机酸代谢研究的意义

2.2论文立题缘起与创新性

第三章.柑桔果实发育过程中有机酸含量及其几种相关代谢酶活性的变化

3.1材料与方法

3.1.1材料

3.1.2测定项目与方法

3.2结果与分析

3.2.1果实发育过程中柠檬酸含量变化

3.2.2果实发育过程中糖酸比变化

3.2.3柑橘各类型果实发育过程中柠檬酸代谢相关酶活性变化

第四章奉节脐橙芽变株系的AFLP分析研究

4.1材料与仪器

4.1 1样品来源

4.1.2主要的试剂和药品

4.1.3主要仪器和设备

4.2.方法

4.2.1 DNA的提取

4.2.2基因组DNA酶切：

4.2.3酶切产物的连接：

4.2.4预扩增反应：

4.2.5选择扩增反应：

4.2.6选择扩增产物的变性聚丙烯酰胺凝胶电泳检测：

4.2.7差异带的回收

4.2.8目标片段的PCR再扩增与鉴定

4.2.9目标片段再扩增产物的纯化克隆测序

4.3结果与分析

4.3.1提取柑橘DNA的质量

4.3.2 DNA的酶切

4.3.3 AFLP分析

4.3.4目标片段的纯化克隆测序

4.3.5目标片段测序结果分析

第5章.讨论

5.1影响柑橘果实有机酸代谢的酶及其活性

5.1.1柑橘果实有机酸的季节变化

5.1.2柠檬酸合成酶(CS)对柑橘果实有机酸积累的影响

5.1.3磷酸烯醇式丙酮酸脱氢酶和PEPC/NAD-IDH

5.1.4乌头酸酶对对柑橘果实有机酸积累的影响

5.2柑橘果实有机酸代谢的分子生物学研究

5.2 1影响AFLP的主要因素

5.2.2差异片段比对结果分析

5.3关于柑橘果实的糖酸比和熟性

结论

参考文献:

发表论文及课题一览表

致谢

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