肾及其原络俞募穴相关联神经支配的可视化研究

摘要

“脏腑和体表相关”是针灸理论的基础和核心内容，内在的脏腑和体表的腧穴通过经络联系在一起，是一个不可分割的整体。这种联系是双向的，既有内在脏腑对体表腧穴的作用，也有体表腧穴对内在脏腑的作用。脏腑出现病理变化时，体表相应的经脉或腧穴会出现一定的症状或者体征，如压痛、痛觉过敏、条索或结节样改变等。有研究也表明受到相关脏腑病变的影响，腧穴局部的物理和电化学性质如体表温度、电阻等也会出现一定的改变。不同脏腑疾病所影响的腧穴具有一定的部位特征，常发生于与本脏腑相关的特定穴上。体表对脏腑的作用则表现在刺激经脉或腧穴可以对相应脏腑的功能起到调节作用，这也是脏腑体表相关最为直接的表现。在临床选穴上，原络俞募穴是使用频率较高的几种特定穴，因而也是研究脏腑体表相关内在机制的常用选穴。
　　脏腑体表相关与现代医学所说的牵涉痛有一定程度的相似性。牵涉痛是指内脏器官出现病变时，不仅该器官会出现疼痛或者不适，在远离该器官的部位也会出现一定的疼痛或者痛觉过敏，牵涉痛的发生主要在相关的躯体，这也可以视为脏腑体表相关在病理状态下的表现。有关牵涉痛发生的机制已有大量的研究，目前主要有三个假说，一是外周神经分支学说，也称为脊髓前汇聚，认为脊神经节中的感觉神经元周围突有分支现象的存在，分别分布于内脏和体表，二者感觉在脊神经节水平发生牵涉。二是聚合-投射学说，该假说认为牵涉痛的发生是由于躯体感觉和内脏感觉在向中枢传导的过程中出现了汇聚，这种汇聚可以发生于脊髓、丘脑以及大脑皮质等各级水平。三是集中-易化学说，该假说认为内脏出现病变时其传入神经末梢会释放一些神经活性物质，这些物质能使邻近传入同一节段的躯体神经末梢的痛阈降低，从而引发牵涉痛。这三种假说都各有依据，目前尚无一致的结论，但这些研究也为中医脏腑体表相关学说提供了一定的依据。
　　除了牵涉痛机制所涉及的感觉传导通路外，脏腑体表相关的研究还需要阐明的是刺激外周腧穴如何对内脏的功能起到调节作用。自主神经是支配脏腑功能的神经，其生理活动不仅受到中枢神经系统的调控，也可以由外周感受器的反射而引起，来自躯体的信号经传入神经上传到中枢后可以传输到自主神经，由此引发内脏功能活动的变化。多项研究表明，针刺外周腧穴对调节血压、腺体分泌以及改善睡眠等自主神经活动起到良好的效果，另外也有电生理研究记录到针刺能引起交感神经放电。因而可以推测，针刺调整内脏功能也有可能通过作用于自主神经活动而起效。但这些研究目前大多还停留在检测相关功能活动的变化方面，尚缺少相应的形态学证据。
　　从足少阴肾经及其原络俞募穴来看，在外联系于四肢的腧穴为原穴太溪和络穴大钟，联系于躯干的腧穴为背俞穴肾俞和募穴京门，其在内联系的脏腑为肾脏，并且也包含肾相关的功能性结构。肾上腺紧邻于肾脏上方靠内侧，与肾脏共同包裹在肾筋膜内，通过分泌肾上腺皮质和髓质激素对人体代谢活动起重要作用。目前国内已有大量研究证实肾阳对人体的推动和温煦功能与下丘脑-垂体-肾上腺轴密切相关。根据肾原络俞募穴在泌尿、生殖和内分泌等系统病症治疗中的广泛应用及其良好的疗效，我们推测外周腧穴在与肾脏发生相互作用的同时也与肾上腺有一定的联系。
　　研究目的:
　　观察周围和中枢神经系统对足少阴肾经原、络、俞、募穴以及肾脏、肾上腺的支配规律和关联性，从感觉、运动和自主神经系统三个方面来阐明肾与其相关特定穴之间的内在联系，从而来探讨脏腑与体表的神经解剖学相关性。
　　研究方法:
　　第一部分：清洁级健康雄性Sprague Dawley大鼠36只，体质量（220±20）g，随机分为太溪组、大钟组、肾俞组、京门组、肾上腺组和肾脏组六组，每组6只。运用单标记神经示踪。大鼠在呼吸麻醉状态下用微量注射器进行示踪剂注射，腧穴局部注射4μL0.1％荧光素结合霍乱毒素亚单位B(AF-CTB)，肾上腺和肾脏注射2μL0.1％AF-CTB，其中肾上腺注射入实质内，肾脏注射入浆膜下靠近肾门的部位。注入2-3d后对实验动物进行心脏灌流，依次灌入0.9％氯化钠溶液和含有4％多聚甲醛以及0.1mol/L磷酸盐缓冲液(phosphate buffered solution，PB，pH7.4)的固定液。灌流完毕后取出双侧交感神经链、胸(Thoracic，T)5-腰(Lumber，L)6节段脊神经节、脊髓和脑干，制作成切片标本，使用荧光显微镜或共聚焦显微镜对标记的相关神经元进行观察和记录。
　　第二部分：清洁级健康雄性Sprague Dawley大鼠12只，体质量（220±20）g，随机分为肾俞-肾上腺组和肾俞-肾脏组，每组6只。采用双标记荧光示踪法。在“肾俞”穴区和肾上腺（肾脏）分别注射入AF488-CTB和AF594-CTB。注射2-3d后进行心脏灌流，取出相应神经组织，制作成切片标本，对标记的相关神经元进行影像学观察和记录。
　　第三部分：清洁级健康雄性Sprague Dawley大鼠5只，体质量（220±20）g，直接进行心脏灌流固定后取出“肾俞”穴区局部皮肤和同侧肾上腺以及肾脏浆膜，运用荧光免疫组织化学染色法标记穴区局部皮肤、肾上腺实质和肾脏浆膜中的酪氨酸羟化酶(Tyrosine hydroxylase，TH)和降钙素基因相关肽(Calcitonin gene related peptide，CGRP)阳性神经纤维。
　　研究结果:
　　第一部分：AF488-CTB和AF594-CTB标记的与大鼠“太溪”、“大钟”、“肾俞”和“京门”穴区以及肾上腺和肾脏相关的感觉神经元分别分布于L4-6L3-6、T10-L1、T10-13和T10-L1、T11-L1节段脊神经节中;相关的运动神经元和交感节前神经元分别分布于L4-6、L3-6、T11-L1、T11-13脊髓前角和T11-13脊髓侧角，没有观察到与肾脏相关的节前神经元，同时在颈(Cervical，C)7-8脊髓前角中观察到了支配“肾俞”和“京门”穴区的运动神经元;与四个穴区和肾上腺、肾脏相关的交感节后神经元分别位于相应节段的交感链中。
　　第二部分：肾俞-肾上腺双标记示踪中，T12、T13和L1节段脊神经节中观察到了AF488-CTB和AF594-CTB双标记的感觉神经元;标记的交感节后神经元主要分布于左侧腰部交感链中，在向肾上腺发出分支水平的交感神经链的神经节中，可以观察到AF488-CTB和AF594-CTB标记的交感节后神经元分布于同一神经节中，并且位置接近;在相应节段脊髓前角观察到了支配“肾俞”穴区的运动神经元，脊髓侧角观察到了支配肾上腺的交感节前神经元。肾俞-肾脏双标记示踪中，T12和T13节段的脊神经节中观察到了AF488-CTB和AF594-CTB双标记的感觉神经元;在下胸段交感神经节中观察到AF488-CTB和AF594-CTB标记的交感节后神经元分布于同一交感神经节中，位置邻近。
　　第三部分：“肾俞”穴区局部皮肤、肾上腺实质和肾脏浆膜内TH标记的交感神经纤维和CGRP标记的感觉神经纤维部分呈现出伴行关系，TH阳性神经纤维在穴区、肾上腺实质和肾脏浆膜内的分布密度均高于CGRP阳性神经纤维。
　　研究结论:
　　1.支配大鼠“肾俞”穴区和肾脏（肾上腺）的感觉神经元在脊神经节表现出交汇和重叠，与牵涉痛的外周神经分支学说一致，这也提示来自大鼠“肾俞”穴区和肾脏（肾上腺）的信号可能通过相同的感觉神经元直接在二者之间建立一种交互的联系。
　　2.支配大鼠“肾俞”穴区与支配肾脏（肾上腺）的交感节后神经元能够存在于交感链的同一节段，并且位置邻近，提示“肾俞”穴区和肾脏（肾上腺）也有可能通过交感神经的途径产生联系。
　　3.从脊髓前角所标记的运动神经元来看，只与大鼠“肾俞”穴区骨骼肌的神经支配有关，说明针刺肾俞不会通过运动传导途径对肾脏（肾上腺）产生影响。

目录

声明

摘要

英文缩略词表

文献综述

研究目的与意义

技术路线图

前言

研究内容

第一部分分别与足少阴肾经原络俞募穴和肾上腺、肾脏相关神经元的形态学特征以及节段性分布规律

1材料与方法

2实验结果

3小结

第二部分“肾俞”穴区和肾上腺、肾脏之间的神经解剖学联系

1材料与方法

2实验结果

3讨论

参考文献

第三部分与“肾俞”穴区局部皮肤、肾上腺和肾脏浆膜相关神经纤维的化学特征

1材料与方法

2实验结果

3讨论

参考文献

研究结论

致谢

个人简历