通脉方对精索静脉曲张大鼠生殖激素及睾丸生精细胞凋亡的干预研究

摘要

精索静脉曲张(Varicocele，VC)是一种血管病变，指精索内蔓状静脉丛的异常扩张、伸长和迂曲，可导致疼痛不适及进行性睾丸功能减退，是男性不育症的常见诱因之一。近年来研究表明生殖激素的调控及细胞凋亡对生精细胞的影响是VC诱发生精功能障碍的重要因素。临床上运用通脉方治疗VC性不育症取得较好疗效，可有效改善因VC引起的精液质量下降。为进一步探究通脉方治疗VC的机制，开展本实验研究。
　　目的：
　　探究通脉方对VC大鼠血清激素水平的调节及生精细胞凋亡的调控，评价通脉方对VC模型大鼠睾丸生精功能的修复作用。
　　方法：
　　先将72只7周SD雄性大鼠随机分为空白对照组12只和造模组60只，参考Turner经典造模法，并运用显微外科器械结扎性腺静脉，减少侧支循环建立VC模型。术后30d，再将造模组大鼠随机分为5组：模型对照组、迈之灵组、通脉方低剂量组、通脉方中剂量组和通脉方高剂量组，每组各12只。分组后开始对各组大鼠灌胃给药，给药体积为1mL/100g体重。迈之灵组大鼠灌胃给予迈之灵水溶液，给药剂量为5.4mg/kg体重，相当于临床用药剂量;通脉方低剂量组大鼠灌胃给予通脉方水煎液，给药剂量为5.45g/kg体重，相当于临床用药剂量1/2;通脉方中剂量组大鼠灌胃给予通脉方水煎液，给药剂量为10.89g/kg体重，相当于临床用药剂量;通脉方高剂量组大鼠灌胃给予通脉方水煎液，给药剂量为21.78g/kg，体重相当于临床用药剂量2倍。模型对照组、空白对照组按上法灌服等体积的蒸馏水，每日给药一次，共48d。
　　药物干预48d后，将大鼠麻醉，下腔静脉取血，采用放射免疫法测定大鼠血清黄体生成激素(LH)、促卵泡激素(FSH)及睾酮(T)浓度。将双侧附睾组织剪碎，游离出精液，采用WLJY-9000北京伟力彩色精子质量检测系统对大鼠精液进行分析。将睾丸剪成两半，一半进行HE染色观察病理学改变及免疫组化检测Bax、Bcl-2、Hsp60、Hsp90的表达，另一半用于Western Blot检测Bax、Bcl-2、Hsp60、Hsp90的表达。
　　结果：
　　(1)HE染色结果
　　空白对照组：曲细精管边界整齐，未见萎缩和塌陷。间质细胞未见增生，生精小管之间连接紧密，基底膜完整;支持结构丰富，管腔中可见大量成熟精子;
　　模型对照组：睾丸组织可见曲细精管排列紊乱，生精上皮细胞脱落变性，精子少见;间质水肿，间质细胞增生;间质小血管充血，管壁增厚明显，管腔狭窄;
　　通脉方低剂量组：曲细精管排列较有序规整，大小较一致;少量生精上皮细胞脱落变性，精子可见;间质细胞增生，间质水肿，间质小血管偶见充血;
　　通脉方中剂量组：曲细精管排列有序规整，边界整齐，可见各级生精上皮细胞，精子可见;少见间质细胞增生及间质水肿，管壁增厚不明显;
　　通脉方高剂量组：曲细精管排列有序规整，大小较一致，见各级生精上皮细胞，管腔有大量精子;少见间质水肿及间质细胞增生;
　　迈之灵组：曲细精管排列有序规整，大小较一致，精子少见;未见间质水肿，未见间质细胞增生。
　　(2)精子浓度分析表明：与空白对照组比较，模型对照组精子浓度显著降低(P＜0.05);与模型对照组比较，通脉方各剂量组精子浓度显著改善(P＜0.05)。
　　(3)精子总活力分析表明：与空白对照组比较，模型对照组精子总活力明显降低(P＜0.05);与模型对照组比较，通脉方各剂量组精子总活力显著提高(P＜0.05)，迈之灵组精子总活力改善不明显（P＞0.05）。表明通脉方可改善精子总活力，效果优于迈之灵。
　　(4)血清FSH检测表明：与空白对照组比较，模型对照组FSH分泌显著上升（P＜0.05）;与模型对照组比较，通脉方低剂量组、通脉方中剂量组FSH分泌显著下降(P＜0.05)。
　　(5)血清LH检测表明：与空白对照组比较，模型对照组LH分泌显著增高(P＜0.05);与模型对照组比较，通脉方各剂量组LH分泌显著降低(P＜0.05)。
　　(6)血清T检测表明：与空白对照组比较，模型对照组T分泌显著下降(P＜0.05);与模型对照组比较，通脉方各剂量组T分泌显著增高(P＜0.05)。
　　(7)睾丸组织Hsp60检测表明：与空白对照组比较，模型对照组Hsp60表达显著降低（P＜0.05）;与模型对照组比较，通脉方各剂量组、迈之灵组Hsp60表达显著增高(P＜0.05)，表明各剂量组通脉方与迈之灵均可上调Hsp60。
　　(8)睾丸组织Hsp90检测显示：与空白对照组比较，模型对照组Hsp90表达显著下降(P＜0.05);与模型对照组比较，通脉方各剂量组、迈之灵组Hsp90表达显著增强（P＜0.05），表明各剂量组通脉方与迈之灵均可上调Hsp90的表达。
　　(9)睾丸组织Bax检测显示：与空白对照组比较，模型对照组Bax表达显著增高（P＜0.05）;与模型对照组比较，通脉方各剂量组与迈之灵组Bax表达显著降低(P＜0.05)，表明各剂量组通脉方及迈之灵均可下调Bax的表达。
　　(10)睾丸组织Bcl-2检测显示：与空白对照组比较，模型对照组Bcl-2表达显著降低(P＜0.05);与模型对照组比较，通脉方各剂量组与迈之灵组大鼠睾丸组织Bcl-2表达显著增高(P＜0.05)，表明各剂量组通脉方及迈之灵均可显著上调Bcl-2表达。
　　结论：
　　通脉方修复VC大鼠生精功能的机制可能为抑制睾丸生精细胞凋亡，其抑制生精细胞凋亡的机制为上调Hsp60、上调Hsp90和下调Bax、上调Bcl-2的表达，调控生殖激素分泌，从而保护睾丸生精功能，改善精子质量。通脉方可显著改善精子质量，疗效显著优于迈之灵。

目录

声明

摘要

英文缩略语表

综述一精索静脉曲张性不育的研究进展

综述二中医药治疗精索静脉曲张性不育症研究进展

实验研究通脉方对精索静脉曲张大鼠生殖激素及睾丸生精细胞凋亡的干预研究

1．材料与方法

2．检测方法

3．统计分析

4．结果

4．1大鼠体重变化情况

4．2精液常规质量分析

4．3 FSH、LH、T表达情况

4．4HE染色情况

4．5 Hsp60、Hsp90、Bax、Bcl-2表达情况

4．6免疫组化图像

5．小结

1．通脉方方义解析

2．迈之灵疗效分析

3．实验设计讨论

3．1造模方法

3．2造模后观察时间设定

3．3取材保存

4．通脉方对FSH、LH、T的调控

5．通脉方对Hsp90、Hsp60表达的调控

6．通脉方对Bax、Bcl-2表达的调控

参考文献

致谢

个人简历