DNA C5胞嘧啶特异的重新甲基转移酶cDNA的克隆及其选择剪接表达的研究

摘要

哺乳动物的DNA甲基化修饰由DNAC5胞嘧啶特异的甲基转移酶(DNAcytosine-5specificmethyltransferase)来催化完成。DNAC5胞嘧啶特异的甲基转移酶与小鼠胚胎的正常发育密切相关。目前，虽然对DNA甲基化的作用已有一定认识，但DNA甲基化的调节以及发育过程中组织特异的DNA甲基化谱的建立机制还不清楚，问题主要在于对催化重新甲基化和去甲基化反应的酶的了解很少，至今仅克隆出两种有功能的哺乳动物DNA甲基转移酶。相对于基因组中序列特异的各个CpG位点，如何以较少种类的DNA甲基转移酶，形成复杂多样的甲基化谱也需要深入探讨。随着对胚胎发育中分子事件的深入研究，寻找与胚胎发育相关的新基因尤为迫切。研究人员1997年从小鼠胚胎cDNA文库中筛选到2＃克隆，通过DNA序列测定，得到1235bp的核苷酸序列。为了研究Dnmt3b在小鼠不同发育阶段和不同组织中的选择剪接表达，研究人员通过RT-PCR及其产物的序列测定与细管电泳分析，发现新生小鼠肺组织主要表达未发生剪接(含编码区362a。a。～382a。a。)的异构体，而成年肺组织在该区主要表达发生剪接的异构体。

目录

论文背景综述：DNA的甲基化修饰与DNA甲基转移酶

材料和方法

1.实验材料

2.实验方法

结果与分析

第一部分、2＃克隆的序列测定与表达谱分析结果

第二部分、RACE结合cDNA文库筛选分离2＃克隆的全长cDNA及其序列分析结果

一、8～9日龄小鼠胚胎组织poly A+RNA的提取和纯化结果

二、第一次5’RACE结果

三、第二次5’RACE结果

四、PCR筛选小鼠胚胎cDNA文库的结果

六、全序列整合及分析

第三部分、CY.seq序列的验证及其在小鼠胚胎组织中选择剪接异构体的克隆结果

第四部分、Dnmt3b在新生和成年小鼠多种组织中选择剪接表达的分析结果

讨论

小 结

参考文献

缩略词表

致 谢