丙型肝炎病毒（Hepatitis C Virus,HCV）聚合酶细胞外复制模型的建立和抗丙型肝炎病毒药物的筛选应用

摘要

丙型肝炎病毒(Hepatitis C Virus,HCV)感染是引起输血后肝炎的最主要病原体,其防治工作是摆在我们面前的艰巨的任务.HCV感染可有多种不同的临床表现,如丙肝病毒携带者和急性肝炎,而40﹪-60﹪的HCV感染者发展为慢性肝炎,并比较快地进展为肝硬变和肝癌等终末期肝病.由于缺乏理想的HCV的体外感染细胞模型,对病毒的生物学特性,致病作用,抗病毒治疗和疫苗的制备等研究受到限制;同时缺乏理想的HCV感染的动物模型,国内外的科学家开始利用HCV RNA复制中起关键作用的酶建立细胞外的以这些酶为靶点的分子模型.该研究建立的HCV NS5b聚合酶细胞分子复制模型,依据来源于HCV NS5b聚合酶在HCV RNA复制中所起的关键作用.NS5b蛋白是RNA依赖性的RNA多聚酶(RDRP),研究证明,重组NS5b具模板引物依赖性,能在体外用HCV 3'端的核苷酸作为复制引物,起动HCV RNA负链的合成.理论上讲,阻断在病毒复制周期发挥关键作用的NS5b聚合酶,可抑制病毒复制,是我们开展抗病毒药物研发的有用工具和理论依据.

目录

英文缩写词表

摘要

Abstract

前言

第一章HCV聚合酶的克隆、表达、纯化

一、实验材料

1.标本来源

2.主要生化试剂

3.分子生物学试剂

4.质粒与菌株

5.主要仪器和设备

6.主要试剂及溶液

二、实验方法

1.HCV RNA的提取(11)

2.HCV目的基因序列的扩增

3.PCR产物的克隆及测序

4.目的基因片段的表达

5.目的基因片段表达产物的纯化(16)

三、实验结果

(一)HCV目的基因片段的克隆与序列分析

(二)目的基因片段的原核表达

四、分析与讨论

(一)HCV目的基因片段的克隆与序列分析

(二)表达产物的纯化

五、小结

第二章HCV细胞外聚合酶模型的建立和应用

一.材料

二.方法

三.结果

四.讨论

五.小结

主要参考文献

第三章 丙型肝炎的疫苗及药物研究进展

第一部分HCV基因的分子生物学

1.HCV的基因结构

2.HCV基因分型

第二部分研制丙型肝炎疫苗

1.液免疫中和抗体疫苗的研究

2.免疫CTL疫苗的研究

3.基因免疫和基因治疗的研究

第三部分对抗HCV药物的研究进展

参考文献

个人简历

致谢

附录