大鼠心肌梗塞后心脏β3肾上腺素受体日节律的变化及GHRP对C57BL/6小鼠日节律的影响

摘要

背景：心肌梗塞和心源性猝死在一天内有明显的好发时段，尤在凌晨高发。交感神经活动及肾上腺儿茶酚胺的分泌也存在昼夜节律，并且其高峰与心梗的高发时间一致。因此交感神经活动加强及血中儿茶酚胺水平增高是心梗的诱发因素之一。β肾上腺素受体(β-AR)可介导交感神经—儿茶酚胺的作用，其中β3-AR的功能是目前的研究热点之一。但β3-AR在心脏的表达节律及其调控机制、心梗后心脏β3-AR发生何种变化，以及这种变化与心梗预后有何关系，目前仍不清楚。本研究的目的之一是研究β3-AR在心梗后的表达和功能的昼夜节律改变。GHRP-6是一种人工合成的生长素释放肽，可通过生长素促泌素受体(GHS-R)影响摄食、睡眠和发挥心血管保护作用。由于生物钟中枢视交叉上核(SCN)存在GHS-R，我们推测GHRP-6可能对生物节律(如运动和心脏节律)有明显影响。本研究的目的之二是验证这一设想。 方法：1．β3-AR研究部分：利用大鼠在体结扎冠脉心梗模型、Real-Time RT-PCR、Western blot、免疫组化、Langendorff离体心脏灌流等方法，研究急性(24小时内)和陈旧性(慢性，心梗14天)心梗时心肌β3-AR的昼夜节律变化以及相应的心功能改变。2．GHRP-6与生物节律部分：利用E-Mitter在体心率监测及转轮运动行为节律监测等方法研究GHRP-6对大鼠心率和C57BL/6小鼠转轮运动日节律的影响，以及检测可能参与GHRP影响生物节律的关键蛋白的表达改变。 结果：1．β3-AR研究部分：(1)正常大鼠心肌β3-AR的表达呈现明显的昼高夜低的日节律：在mRNA水平，白天的最高值可达夜晚最低值的18倍之多；在蛋白质水平，白天的最高值也是夜晚最低值的2.7倍。(2)在急性和慢性心梗模型中，β3-AR表达的昼夜节律均严重减弱，有的甚至完全消失。而一些核心钟基因(bmal1，npas2)的表达节律却明显增强。(3)在β3-AR被激动后，正常大鼠心率、心肌收缩力在白天(ZT6)的变化十分明显，心率增加为原来的2.7倍，收缩力降低至原来的33.5％；而夜间(ZTl8)变化不明显。在急性和慢性心梗模型中，白天和夜间的心率和张力相比无显著差异。 2．GHRP-6与生物节律部分：(1)大鼠是昼伏夜出动物，正常时夜间的心率较白天快。GHRP-6(100μg/kg)可使大鼠夜间心率显著降低，而对白天的心率影响不大，因而GHRP-6可减弱大鼠心率日节律。(2)GHRP-6(100μg/kg)使C57BL/6小鼠转轮日节律(睡眠-觉醒日周期)明显延长达41分钟，运动周期向后漂移，并降低运动活性。(3)GHRP在夜晚(ZT12)给药可使C57BL/6小鼠SCN的Prokineticin 2(PK2)节律蛋白表达增高，这可能与GHRP抑制转轮日节律有关。 结论：1．正常大鼠心肌β3-AR的表达和功能呈现昼高夜低的24小时节律，急性和慢性心梗时，心肌β3-AR的节律表达均钝化甚至消失。2．大鼠急性和慢性心梗后，钟基因Npas2和Bmall表达的昼夜节律振荡幅度加大，这与β3-AR的节律改变方向相反，提示心脏钟控基因可能对β3-AR有负反馈调控作用。3．GHRP-6使C57BL/6小鼠转轮运动日周期明显向后漂移，运动活性降低，并使夜间SCN的PK2表达增高，GHRP-6诱发的PK2表达的夜间高峰可能是GHRP-6引起运动节律改变的原因之一。4．GHRP-6使大鼠心率日节律明显减弱，推测GHS-R信号通路可能对心脏节律有调节作用。

目录

论文说明：缩略语表

摘要

第一部分：大鼠心肌梗塞后心脏β3肾上腺素受体日节律的变化

引言

材料与方法

结果

讨论

结论

参考文献

第二部分 CHRP对C57BL/6小鼠日节律的影响

前言

材料与方法

结果

讨论

结论

参考文献

综述一： 心脏活动的昼夜节律

综述二： 谷氨酸受体在外周组织的表达和功能

个人简历

致谢