Ⅰ型单纯疱疹病毒衣壳蛋白UL25与细胞骨架微管蛋白的相互作用及其生物化学分析

摘要

Ⅰ型单纯疱疹病毒(Herpes Simplex Virus 1，HSV-1)是一种常见的病原体，人是其唯一自然宿主。病毒通过受损皮肤及粘膜感染宿主，在上皮组织增殖，且能进一步从感染的上皮组织的神经末稍入侵神经元，并于初次感染后在三叉神经节、背根神经节等处建立伴随终生的潜伏性感染。 HSV-1 UL25基因编码一个重要的病毒衣壳蛋白，位于衣壳外表面五邻体顶角附近。目前研究发现该蛋白参与了病毒感染过程中的许多重要生物学过程，包括病毒在细胞内的转运、增殖、装配等。利用酵母双杂交筛选技术，我们发现UL25与宿主细胞不同的结构性和功能性蛋白存在相互作用，其中之一为与细胞骨架微管蛋白的相互作用。半乳糖苷酶活性分析实验显示两者的相互作用具有特异性。 将UL25重组到绿色荧光报告载体pEGFP-N2中，对构建的UL25-EGFP融合蛋白进行细胞内荧光分析，结果表明UL25分布于细胞质中，与经免疫荧光染色的细胞骨架微管蛋白共定位。进一步利用秋水仙碱破坏细胞骨架微管结构后，发现UL25的分布与紊乱的微管蛋白亦基本重合，表明两者在空间上具有明确的相互作用关系。由于HSV病毒在被感染细胞内沿细胞骨架微管移动，基于上述双杂交实验和荧光分析，推测UL25可能在病毒衣壳细胞内转运中具有重要的意义。 实验进一步对UL25基因不同片段的缺失突变体进行荧光定位分析，结果发现U125 135-353aa和其羧基端360-580aa与UL25蛋白定位相似，而UL25氨基端140aa除在胞质内与微管蛋白共定位外，还同时定位于细胞核中。结合酵母双杂交实验筛选到UL25与细胞内转录调控蛋白如转录延伸因子存在相互作用的事实，提示UL25蛋白在核内参与了某些未知的功能作用，氨基端可能是其与不同蛋白相互作用的重要区域。

目录

声明

摘要

前言

一、实验材料和方法

(一) 实验材料

(二)实验方法

二、结果与分析

三、 讨论

小结

参考文献

论文综述 HSV-1衣壳蛋白UL25及其功能研究进展

附录

致谢

研究生简历