抗髓鞘少突胶质细胞糖蛋白抗体生物学特性研究

摘要

多发性硬化（Multiple Sclerosis，MS）是一种中枢神经系统自身免疫性疾病，细胞免疫一直被认为在MS的发病机制中发挥主要作用，然而近年来研究显示体液免疫亦发挥着重要作用。在诸多髓鞘蛋白中，髓鞘少突胶质细胞糖蛋白（MyelinOligodendrocyte Glycoprotein，MOG）是唯一可以在MS的动物模型--实验性自身免疫性脑脊髓炎（Experimental Autoimmune Encephalomyelitis，EAE）中同时诱导出致病性自身抗体与致脑炎T细胞反应的抗原，因而被认为是最有研究前景的靶抗原。然而自1999年开始有多项研究表明MS患者血清抗MOG抗体阳性率与健康对照之间并不存在显著差异，于是研究者们推测抗MOG抗体有可能是一组抗体，包括致病性与非致病性两大类，进而研究方向逐渐转向如何鉴别这两类抗体上。致病性与非致病性抗体是识别MOG不同表位的，有关致病性抗体识别表位的研究有三个主要方向，包括线性肽段表位、构象表位及糖基化表位，其中线性肽段表位研究是目前研究的一个热点。有关特异性线性表位研究在国外已有较多报道，但主要集中在EAE模型上，基于MS患者的特异性线性表位研究到目前为止只有三篇，且结论不一致。在国内，有关MS患者抗MOG抗体的研究至今还不多，特别是用MOG整蛋白作为抗原检测抗体以及有关抗MOG抗体线性表位特异性方面的研究还是空白。因此检测中国MS患者抗MOG整蛋白抗体并进行抗MOG抗体表位特异性的研究，可以将中国人群的抗MOG抗体在人群中的分布特点与国外的数据进行比较，并且填补国内有关致病性抗MOG抗体线性表位特异性研究的空白。进一步认识我国MS患者的免疫学发病机制，寻找针对我国患者早期预测疾病进展、提示治疗效果或评估预后的血清学标记物。
　　 目的：
　　 证实抗MOG抗体在中国人群中普遍存在，探究中国多发性硬化/视神经脊髓炎患者抗MOG抗体识别MOG蛋白的表位特异性。
　　 方法：
　　 1.临床资料收集：自2009年4月至2010年4月期间，收集在北京协和医院神经内科门诊就诊或住院治疗的MS/NMO患者67例（包括43例经典型多发性硬化cMS、10例视神经脊髓型多发性硬化OSMS及14例视神经脊髓炎NMO），和其他神经系统疾病（Other Non-inflammatory Neurological Diseases，ONND）患者60例，收集健康体检中心健康对照77例，将上述3组人群进行年龄性别的匹配，入选者签署知情同意书后采外周血，离心冷冻保存备用。收集所有MS/NMO患者详细病史、体格检查及EDSS评分、实验室检查、影像学检查及治疗方案等临床资料。
　　 2.抗MOG整蛋白抗体检测：应用酶联免疫吸附（Enzyme-Linked ImmunosorbentAssay，EL，ISA）方法，以重组人MOG蛋白胞外段1-125aa为抗原检测3组人外周血抗MOG抗体。
　　 3.抗MOG抗体表位特异性检测：将MOG蛋白胞外段1～125氨基酸划分为25个短肽进行人工合成，每个短肽为12个氨基酸，相邻短肽有7个氨基酸重叠，应用ELISA方法，检测3组人抗MOG抗体识别MOG蛋白胞外段的表位特异性
　　 4.分析表位特异性抗MOG抗体与临床资料之间的关联。
　　 结果：
　　 1.MS/NMO、ONND及HC三组抗人MOG蛋白胞外段抗体无显著差异（P>0.05）。cMS、OSMS及NMO三个疾病亚组抗人MOG蛋白胞外段抗体亦无显著差异（P>0.05）。
　　 2.抗MOG12～23与抗MOG27～38抗体在MS/NMO患者中显著升高（P<0.01）。应用ROC曲线评估其临床诊断价值显示，抗MOG27～38抗体较抗MOG12～23抗体具有更好的临床诊断价值。
　　 3.抗MOG97～108抗体在ONND组与HC组显著升高（P<0.01）。
　　 4.抗MOG27～38抗体与临床资料的关联分析结果显示：发作期MS/NMO患者抗MOG27～38抗体阳性率显著高于缓解期患者（P<0.05）；MS/NMO总复发次数较高组（>3次）的抗MOG27～38抗体阳性率显著高于总复发次数较低组（<3次）（P<0.05）。
　　 5.在11例接受β1b干扰素治疗的cMS患者中，抗MOG27～38抗体阳性患者应用干扰素治疗后复发率低于抗MOG27～38抗体阴性患者，但目前例数较少尚未显示出显著差异。
　　 结论：
　　 1.抗MOG抗体在不同亚型脱髓鞘疾病患者、非炎性神经系统疾病患者及健康人中广泛存在。
　　 2.人群外周血中抗MOG抗体存在表位特异性，MS/NMO患者抗MOG抗体的特异识别表位为27～38aa与12～23aa，ONND和HC人群抗MOG抗体的特异识别表位为97～108aa。
　　 3.抗MOG27～38抗体在诊断MS/NMO患者方面具有更好的临床价值
　　 4.与抗MOG27～38抗体阴性患者相比，抗MOG27～38抗体阳性患者对β1b干扰素治疗反应有较好的趋势。

目录

文摘

英文文摘

英文缩略词及注释

前 言

第一部分：检测中国人群血清抗MOG抗体

实验目的

材料与方法

结果

讨论

结论

第二部分： 抗MOG抗体表位特异性研究

实验目的

材料与方法

结果

讨论

结论

参考文献

综述： MOG生物学特性及其在多发性硬化中的研究

MOG的结构特点

MS中MOG抗体研究现状

线性表位的研究

构象表位的研究

糖基化表位的研究

参考文献

致谢

附录一 MS/NMO数据库入选表

附录二、个人简历