肺分枝杆菌感染临床特征、耐药模式、预后研究及肺组织结核分枝杆菌巢式PCR检测

摘要

目的:建立临床肺活检组织结核分枝杆菌分子快速检测方法,并评价该方法敏感性、特异性。进一步应用该方法研究结节病患者肺组织结核分枝杆菌基因检出情况,评价该方法对肺结节病及肺结核鉴别诊断价值。
　　 方法:收集北京协和医院2008年至2009年经支气管镜肺活检、经皮肺穿刺活检、电视胸腔镜手术(Video—assisted thoracoscopic surgery,VATS)或开胸手术肺活检组织标本,选取诊断明确临床资料完整者共110例。肺结核病组47例(抗酸染色和/或分枝杆菌培养阳性20例,组织病理学诊断21例,临床诊断6例),对照组63例(肺结节病组23例,肺癌组10例,肺真菌组19例,肺细菌组11例)。提取组织DNA,巢式PCR(Nested polymerase chain reaction,nPCR)方法扩增结核分枝杆菌特异插入序列IS6110基因。同时收集组织细菌、真菌、分枝杆菌涂片和培养等病原学结果以及组织病理结果等临床资料。
　　 结果:IS6110—nPCR检测下限为100fg DNA模板量(约20条结核分枝杆菌)。36例(76.6％)肺结核组织扩增阳性,52例(82.5％)非结核肺组织扩增阴性。肺结核组nPCR阳性者中具有肉芽肿等典型病理表现比例高于nPCR阴性者,而组织抗酸染色阳性、分枝杆菌培养阳性、经皮肺穿刺/TBLB组织、VATS/开胸肺组织、新鲜组织、FFPE组织比例无显著性差异。11例(23.4％)肺结核组扩增阴性,11例(17.5％)对照组扩增阳性,其中肺结节病组6例,肺真菌组5例。26.1％肺结节病患者肺组织可检出结核分枝杆菌DNA,极显著低于肺结核组(P<0.001)。
　　 结论:nPCR扩增IS6110基因检测肺组织标本诊断敏感性达76.6％,特异性82.5％,与组织病理论断方法结合敏感性进一步提高至87.2％。组织病理具有肉芽肿等典型表现的肺组织检测敏感性更高,而肺组织抗酸染色、分枝杆菌培养等病原学结果、组织来源及组织类型均不影响检测结果。该方法诊断肺结核感染假阳性率17.5％,假阴性率23.4％,假阳性见于肺结节病和肿真菌感染患者。结核分枝杆菌与肺结节病存在相关性,但肺结节病组织结核分枝杆菌DNA检出率明显低于肺结核病组织,因此该方法可作为两者分子鉴别诊断方法。