应用氟18标记新半乳糖白蛋白进行肝功能评估的临床前研究

摘要

1．小鼠四氯化碳肝纤维化模型的建立
　　 目的：建立一套简便可行的小鼠肝纤维化建模方法，以利用结合氟18标记新半乳糖白蛋白([18F]FNGA)的正电子发射断层显像(PET)扫描开展临床前动物试验。
　　 方法：对6～7周龄的雌性昆明小白鼠每48h腹腔注射10％的四氯化碳油溶液0.4ml,42天后检测小鼠血清学实验室指标及肝脏病理改变。
　　 结果：肝纤维化模型组小鼠的血清总蛋白水平低于正常组(p＜0.001)和对照组(p＜0.05)，白蛋白水平低于对照组(p＜0.05)，碱性磷酸酶水平高于正常组(p＜0.05)，胆碱酯酶水平低于正常组(p＜0.05)和对照组(p＜0.01)；模型组小鼠肝脏病理见小叶间隔明显纤维化，小叶中央静脉相对明显增粗，小叶内肝细胞灶性坏死严重，大量砂粒体样钙化形成。
　　 结论：小鼠腹腔注射四氯化碳油溶液可以简便并且成功地建立小鼠肝纤维化模型。
　　 2．[18F]FNGA在小鼠肝纤维化模型中的研究
　　 目的：明确[18F]FNGA在肝功能不同的小鼠当中的摄取、代谢和生物分布情况，验证其生物有效性。
　　 方法：将肝纤维化模型组小鼠和对照组小鼠均随机分成三组，分别于经尾静脉注射[18F]FNGA5min、30min、1h后处死小鼠，取出肝脏等器官测量放射性活度计数。
　　 结果：在两组小鼠中，注射后5min、30min和1h，[18F]FNGA在肝脏均有显著浓聚。5min时，血当中的放射性活度相对较高，随后迅速下降,30min时已降至非常低的水平。30min时对照组(p＜0.05)和肝纤维化组(p＜0.001)小鼠尿中的放射性活度明显高于肝脏，1h时对照组(p＜0.05)小鼠尿中的放射性活度明显高于肝脏。
　　 结论：证实了[18F]FNGA主要在动物的肝脏内浓聚，而且浓聚时间足够长；[18F]FNGA主要经动物的肾脏排泄，通过尿液排出体外；[18F]FNGA的摄取、代谢与肝脏功能有关。
　　 3．[18F]FNGA的临床前动物显像研究
　　 目的：证实[18F]FNGA可用于动物PET显像，并观察其在生物体内代谢过程。通过[18F]FNGA相关参数的初步探索，明确其在肝功能评估中的作用。
　　 方法：将肝纤维化模型组小鼠和对照组小鼠均随机分成两组，分别进行30min和1h的MicroPET扫描。所有小鼠在前30min均每次采集2min，两次采集之间间隔1min，共采集10次，扫描1h的小鼠后30min每次采集5min，两次采集之间间隔1min，总共采集15次。采集完毕后通过眼眶取血方法取得血液样本检测血清学指标。利用MicroPET系统自带软件处理扫描数据，勾画小鼠肝脏和心脏感兴趣区，计算肝脏摄取能力(LUA)、峰值时间(tP)、千倍肝脏摄取率(LK1000)、NGA清除指数(CI)。
　　 结果：肝脏对于[18F]FNGA的摄取比较迅速，其它腹腔脏器几乎不显影，肝脏显像清晰且持续时间长。[18F]FNGA相关参数中，对照组小鼠的LUA(p＜0.05)和LK1000(p＜0.05)均明显高于肝纤维化组，而tP(p＜0.01)明显低于肝纤维化组。LUA与血清总蛋白水平呈正相关(r=0.559，p=0.038);tP与血清总蛋白水平呈负相关(r=-0.632，p=0.015)，与血糖水平呈正相关(r=0.719，p=0.029);LK1000与血糖水平呈负相关(r=-0.730，p=0.025)，与总胆酸水平呈负相关(r=-0.690，p=0.006)。
　　 结论：[18F]FNGA进入小鼠体内后立即被肝脏摄取，并且滞留时间足够长。所获得的[18F]FNGA相关参数对于肝脏功能有一定的提示作用。