应用蛋白质组学方法研究盐角草(Salicornia europaea L.)的抗盐性—盐角草双向电泳体系的建立

摘要

盐角草(Salicornia europaea L.)是世界上最抗盐的高等植物之一。应用蛋白质组学方法对其抗盐性进行研究，对于我们理解植物抗盐机理和改进作物耐盐性都有重要意义。双向电泳是蛋白质组学的核心技术，样品制备是双向电泳的关键步骤。盐角草是一种聚盐的真盐生高等植物，其体内除含有多种次生代谢物质外还含有大量盐分，而盐离子的存在严重干扰等电聚焦的进行，其蛋白质提取较其他植物更为困难。因此，在进行蛋白质组学研究之前，有必要对其蛋白质提取方法进行摸索，建立一个高效的双向电泳体系。
　　 比较了三氯乙酸/丙酮沉淀法(TCA)、三氯乙酸沉淀法(E-TCA)和酚抽法(Phe)三种方法对盐角草蛋白的提取效果。提取700mM处理2d的盐角草幼苗蛋白时，三种方法分别得到579，343和535个蛋白点；TCA和E-TCA法所得图谱均存在严重的横向纹理，Phe法所得图谱则背景干净，基本上没有纹理。说明Phe法不仅能很好地提取盐角草蛋白，而且能有效去除样品中的盐分。对200mM处理90d的盐角草蛋白的提取也证实了这一点。比较了不同沉淀剂对Phe法蛋白提取效果的影响，结果表明，甲醇不能代替乙酸铵甲醇溶液。对Phe法的提取液进行了改进，所得图谱背景更加清晰，蛋白点数增加。此外，还对聚焦时间，上样量和染色方法进行了改进优化，建立了盐角草双向电泳体系。
　　 本研究表明，Phe法适合于盐角草双向电泳样品的制备，这为其他盐生植物以及嗜盐微生物蛋白质的提取提供了重要参考。

目录

文摘

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论文说明：缩略词

声明

第一章 文献综述

1.1植物抗盐机理研究

1.1.1植物抗盐性

1.1.2应用系统生物学方法研究植物抗盐性

1.2基于双向电泳技术的蛋白质组学方法

1.2.1蛋白质组学概述

1.2.2蛋白质样品制备

1.2.3蛋白质分离-双向电泳技术

1.2.4蛋白质的检测

1.2.5蛋白质的鉴定-质谱技术

1.3盐角草(Salicornia europaea L.)研究概述

1.3.1盐角草的抗盐性及其抗盐机理

1.3.2盐角草的应用价值

1.4立题依据

第二章 材料与方法

2.1实验材料

2.1.1植物材料

2.1.2试剂

2.2实验方法

2.2.1试剂配制

2.2.2蛋白质提取方法

2.2.3蛋白质双向电泳

2.2.4图像获得与分析

第三章 实验结果

3.1等电聚焦体系的确立

3.2沉淀剂对Phe法蛋白提取效果的影响

3.3三种蛋白质提取方法的比较

3.3.1等电聚焦行为比较

3.3.2双向电泳图谱比较

3.4染色方法的改进

3.5酚抽法的改进

第四章 结论与展望

4.1讨论

4.1.1盐离子对等电聚焦的影响

4.1.2盐离子对蛋白质提取的影响

4.1.3不同除盐策略的比较

4.1.3盐生植物双向电泳样品制备

4.2结论

4.3展望

参考文献

致谢

个人简历、在学期间发表的学术论文与研究成果