一种壮药白花九里明提取物咖啡酸含量、妇科止血作用及机制研究

摘要

目的：本课题以壮药白花九里明一种提取物（下面称提取物A）为研究对象，针对白花九里明治疗产后出血药效及作用机理不够清晰，检测指标不够明确的问题进行研究。首先通过测定白花九里明提取物中咖啡酸含量，来了解其中具止血作用有效成分；然后通过考察提取物对小鼠出血、凝血的影响，对大鼠的凝血四项的影响，及对小鼠离体子宫实验，探讨其妇科止血作用；最后从血液和血管两个角度考察提取物对产后出血大鼠模型的影响，从而实现对白花九里明较全面的药效及机理评价研究，为白花九里明的开发利用提供理论基础。　　方法：第一部分：咖啡酸含量测定：采用高效液相色谱法，使用Agilent色谱柱，以乙腈-磷酸为流动相等度洗脱，测定提取物A的咖啡酸含量。第二部分：妇科止血作用及机制研究：1）对小鼠子宫平滑肌：采用小鼠离体子宫实验法，观察不同浓度提取物A对小鼠正常子宫以及缩宫素干预下小鼠离体子宫的平均张力，收缩活力和收缩频率的影响，以及与阿托品、心得安和乙酰胆碱联合给提取物A后对子宫平滑肌收缩作用影响。2）对未造模出血时间、凝血时间和凝血系统（凝血四项）测定：通过尾尖出血法、载玻片法、毛细玻璃管法对KM小鼠止血时间的影响进行探讨；SD大鼠随机分高、中、低、空白和阳性对照组五组，对大鼠凝血功能指标纤维蛋白原、活化部分凝血活酶时间、凝血酶时间、凝血酶原时间的影响。3）对Wistar大鼠产后出血模型建立：Wistar大鼠随机分高、中、低、空白、阳性、模型组六组，每组20只，采用王氏造模方法造大鼠产后出血模型，测分别给药高、中、低剂量提取物A和阳性药后，对子宫出血量的影响。4）对造模后凝血系统（凝血四项）、血小板粘附性、血小板聚集度、血小板数量的测定。　　结果：第一部分：提取物A中含有一定量的咖啡酸，咖啡酸在0.12mg?0.195mg范围内与峰面积呈良好的线性关系，回归方程为2y?12269x+150.99,R2=0.9996，加样平均回收率99.75%，RSD为0.4%。提取物A本次测量得咖啡酸含量平均值为112.3?g/g。第二部分：1)、0.16mg?0.64mg浓度收缩活力、收缩频率和平均张力有明显变化，数值与生理盐水组比较P＜0.05，有统计学意义，呈兴奋作用。提取物A随着浓度增大收缩活力明显增强。M受体阻断剂阿托品与0.32mg提取物A联用，收缩活力和频率均小于单独0.32mg提取物A，且P＜0.05，有统计学意义。?1和?2肾上腺素受体阻滞剂心得安与0.32mg提取物A联用，收缩活力和频率均远小于单独0.32mg提取物A，且P＜0.05，有统计学意义。M受体兴奋药乙酰胆碱与0.32mg提取物A联用，收缩活力和频率均远大于单独0.32mg提取物A，且P＜0.05，有统计学意义。2）、尾尖出血法：给药高、中、低剂量提取物A，均缩短了对小鼠出血时长，中剂量组出血时间最短，与空白组相比，高、中、低剂量提取物A P＜0.05，具有显著统计学差异；载玻片法：给药高、中、低剂量提取物A均缩短了小鼠凝血时长，中剂量组凝血时间最短，与空白组相比，高剂量组P＜0.05，中、低剂量组P＜0.01，具有统计学差异；毛细玻璃管法：给药高、中、低剂量提取物A均缩短了小鼠凝血时间。其中中剂量组凝血时间最短，与空白组相比，高剂量组P＜0.05，中、低剂量组P＜0.01，具有统计学差异。提取物A可缩短凝血酶原时间，也可缩短活化部分凝血活酶时间。3）、造模部分提取物A对大鼠子宫出血量有显著降低作用，与模型组比较，阳性对照组，和提取物A高、中、低剂量组P＜0.05。其中中剂量组出血量最低，止血效果最好。4）、造模后部分对血管作用：提取物A对造模后大鼠均能降低血管中的血管紧张素II和前列腺素的含量。与模型组比较，阳性对照组，和提取物A高、中、低剂量组均有部分P＜0.05，有显著性差异。对血液作用：对造模后大鼠作用，可以缩短凝血酶原时间P＜0.05，可缩短APTT活化部分凝血活酶时间P＜0.05，可增加FIB纤维蛋白原P＜0.05。提取物A对TT时间增加，但凝血酶时间P＞0.05，无统计学意义；与模型组比较，不同剂量提取物A血小板粘附性明显增加，且P＜0.05，有统计学意义；与模型组比较，不同剂量提取物A血小板聚集度明显增强，且P＜0.05，有统计学意义；EDTA抗凝，与模型组比较，提取物A对造模后大鼠的血小板数量有增多作用，但P＞0.05，无统计学意义。枸橼酸钠抗凝，与模型组比较，提取物A对造模后大鼠血小板数量有增多作用，且P＜0.05，有统计学意义。　　结论：1、提取物A具有止血作用的咖啡酸成分；2、不同浓度提取物A对KM小鼠具有收缩子宫平滑肌作用；可能是通过影响M受体、N受体、非选择性的?受体而实现的；3、不同浓度提取物A能够减少出血和凝血时间，初步筛选出凝血系统的止血途径，应该是受到APTT与PT影响的外源性凝血途径和内源性凝血途径；4、提取物A能够减少子宫出血模型的大鼠子宫出血量达到止血效果；5、提取物A针对造模后大鼠可以降低其血管中血管紧张素Ⅱ和前列腺素E2含量，从而修复子宫内膜，收缩血管，减少血流量，达到止血目的；6、提取物A可以增加血小板粘附能力和聚集功能，从而达到止血目的。7、提取物A可以增加血小板数量，促进血凝并形成坚实的止血栓子，达到止血效果。

目录

声明

引言

第一部分 白花九里明的研究进展

1 白花九里明的植物来源

2 白花九里明的化学成分研究

3 白花九里明的止血作用研究

4 白花九里明的其他药理作用研究

第二部分 提取物A中咖啡酸含量测定

1 实验材料

1.1药品与仪器

1.2 药材

1.3 溶液制备

2 方法

2.1 标准曲线

2.2 精密度实验

2.3 重复性实验

2.4 稳定性试验

2.5 加样回收率实验

3 结果

4 讨论

第三部分 提取物A妇科止血作用及机制研究

1 提取物A与拮抗剂、激动剂联合对子宫平滑肌影响

1.1实验材料

2.1方法

3.1 结果

4.1 讨论

2 提取物A对KM小鼠出凝血的影响

2.1 实验材料

2.2 方法

2.3 结果

2.4 讨论

3 提取物A对SD大鼠凝血系统的影响

3.1 实验材料

3.2 方法

3.3 结果

3.4 讨论

4 建立Wistar大鼠产后出血模型、考察提取物A对模型大鼠出血量的影响

4.1 实验材料

4.2 方法

4.3 结果

4.4 讨论

5 提取物A对模型大鼠血管的影响

5.1 实验材料

5.2 方法

5.3 结果

5.4 讨论

6 提取物A对模型大鼠血液系统的影响

6.1 实验材料

6.2 方法

6.3 结果

6.4讨论

总结与展望

缩略词表

参考文献

综述:绿原酸及其异构体的药理作用及不良反应的研究进展

参考文献

致谢

个人简历及攻读学位期间获得的科研成果