婴幼儿配方乳粉中非蛋白氮含量测定方法的改进与应用

摘要

蛋白质含量是婴幼儿配方乳粉中最重要的指标，测定这一指标的国家标准方法是经典的凯氏定氮法(Kjeldahl method)，即测定样品总氮并折算出粗蛋白含量。该法不能区分氮的来源，存在被掺入含氮量高的非蛋白物质冒充合格产品的风险。通过沉淀蛋白质处理后再用凯氏定氮法，可测定样品中非蛋白氮含量，辅助判定产品是否掺假。本课题在婴幼儿配方乳粉中模拟掺入三聚氰胺，探讨蛋白质沉淀剂对测定非蛋白氮含量标准方法的影响因素，建立新的改进方法，并在实际检测中应用验证。主要结果如下：　　1.蛋白质沉淀剂的比较与筛选　　比较不同蛋白质沉淀剂(三氯乙酸、丙酮、乙酸铅和草酸钾-磷酸氢二钠、乙酸锌溶液和亚铁氰化钾)的分离效果，发现三氯乙酸沉淀法相比其它方法操作步骤更少，计算公式更精准，结果的准确度和稳定性更好。实验还发现，用超声辅助溶解方式替代搅拌，可确保样品完全溶解。　　2.三氯乙酸沉淀法的改进和最适条件　　实验结果表明，10mL15%三氯乙酸可沉淀约0.1089g蛋白质，据此提出的改进意见是根据对样品中蛋白质含量的预判调整沉淀剂的用量，以节约试剂，缩短消化时间。　　设置沉淀剂浓度、消化滤液量和滴定盐酸浓度为单因素正交试验，结果表明，三氯乙酸浓度对测定结果影响最大。实验最佳条件为用15%三氯乙酸沉淀，取14g滤液进行消化，用0.0101mol/L盐酸滴定。　　3.改进方法对市售乳粉中三聚氰胺检测的应用与验证　　用改进三氯乙酸沉淀法测得的非蛋白氮含量对照异常数据预警线，可对可疑样品进行初筛，用高效液相色谱法(HPLC)进一步验证是否含有三聚氰胺等高含氮物质。

目录

声明

1 绪论

1.1 引言

1.2乳粉中非法添加物的存在原因和影响

1.3乳粉市场需求和市场占比情况

1.4乳粉相关标准修订变化情况

1.5非蛋白氮与三聚氰胺检测方法

1.5.1凯氏定氮法

1.5.2燃烧定氮法

1.5.3双缩脲比色法

1.5.4 Folin酚试剂法

1.5.5考马斯亮蓝法

1.5.6茚三酮法

1.5.7毛细管电泳法

1.5.8 色谱检测技术（高效液相色谱法、气相色谱-质谱法、液相色谱-质谱/质谱法）

1.5.9光谱检测技术（荧光光谱法、近红外光谱法、拉曼光谱法）

1.5.10分子印迹聚合物（MIPs）法

1.5.11酶联免疫检测法

1.6课题问题的提出

1.7课题研究目的、内容和意义

1.8课题创新之处

1.9 课题研究路线图

2蛋白质沉淀剂的比较与筛选

2.1材料与仪器

2.1.1实验试剂

2.1.2实验仪器

2.2实验方法

2.2.1试剂配制

2.2.2样品制备

2.2.3样品测定

2.3结果与分析

2.3.1不同沉淀剂方法的非蛋白氮含量和加标回收率比较

2.3.2不同加标量对加标回收率的影响

2.3.3不同样品溶解方式对非蛋白氮含量和加标回收率的影响

2.4小结

3 三氯乙酸沉淀法的改进和适用范围

3.1材料与仪器

3.2实验方法

3.2.1三氯乙酸（沉淀剂）的量与样品中蛋白质含量的关系

3.2.2三聚氰胺溶解度实验（观察三聚氰胺溶解和析出现象）

3.2.3全自动凯氏定氮仪的检测限

3.3结果与分析

3.3.1沉淀剂的量与样品中蛋白质含量的关系

3.3.2三聚氰胺溶解度实验

3.3.3仪器检测限的影响

3.4小结

4三氯乙酸沉淀法影响因素及最适实验条件

4.1材料与仪器

4.2实验方法

4.2.1试剂配制

4.2.2样品制备

4.2.3样品测定

4.3结果与分析

4.3.1单因素-三氯乙酸浓度对非蛋白氮含量的影响

4.3.2单因素-消化滤液的量对非蛋白氮含量的影响

4.3.3单因素-滴定盐酸浓度对非蛋白氮含量的影响

4.3.4正交实验

4.4小结

5 改进非蛋白氮测定方法的应用效果与验证

5.1材料与仪器

5.1.1实验试剂

5.1.2实验仪器 仪器名称

5.1.3样品来源

5.2实验方法

5.2.1试剂配制

5.2.2样品制备

5.2.3样品测定

5.3结果与分析

5.3.1改进三氯乙酸沉淀法测定非蛋白氮含量结果

5.3.2高效液相色谱法-标准曲线绘制与加标回收率

5.3.3市售婴幼儿配方乳粉三聚氰胺超标情况调查分析

5.4小结

6 结论与展望

6.1结论

6.2展望

参考文献

致谢

附录