SSR分子标记在杂交水稻品种纯度鉴定中的应用研究

摘要

本研究以内5优8015、Y两优689、Ⅱ优7954、钱优1号、株两优06、浙优12、浙优18、春优84等8个杂交稻品种为试验材料，每个品种种子均分别来至上海、江西、海南、广西、江苏等5个制种基地，探讨SSR分子标记在杂交水稻品种纯度快速鉴定中的应用，主要结论如下：　　 ⑴通过对水稻种子DNA快速提取方法的改进，优化原有提取方法中的关键步骤，确定不同杂交水稻品种种子的最佳DNA快速提取方法:8个品种种子提取液最佳浸泡时间不同，内5优8015、Ⅱ优7954、钱优1号、浙优12、浙优18等5个品种种子的最佳浸泡时间均为12h，但Y两优689、株两优06、春优84等3个品种种子需20 h。此外，8个杂交稻品种种子提取物第一步离心均以15 min为最佳条件。　　 ⑵对原有PCR扩增体系进行优化，确定各品种纯度检测的最优PCR扩增体系(10μl)。内5优8015、Ⅱ优7954、钱优1号、浙优12、浙优18等5个品种的PCR反应体系:Mix5μl, DNAlμl, Forward primer0.25μl, Reverse primer0.25μl, H2O3.5μl;Y两优689、株两优06、春优84等3个品种纯度检测的PCR反应体系:Mix5μl，DNA1.5μl, Forward primer0.25μl, Reverse primer0.25μl, H2O3μl。　　 ⑶根据国家水稻品种鉴定DNA指纹方法推荐的24对SSR引物分别对内5优8015、Y两优689、Ⅱ优7954、钱优1号、株两优06、浙优12、浙优18、春优84等8个杂交稻品种DNA进行PCR扩增，筛选出每个品种特异性条带最明显、整体效果最佳的引物作为标准图谱的构建。通过对这8个杂交稻品种种子进行SSR分子标记纯度鉴定，结果如下:内5优8015、Y两优689、Ⅱ优7954、钱优1号、株两优06、浙优12、浙优18、春优84等8个杂交稻品种的平均纯度分别是96.3％、97.6％、96.3％、96.1％、96.9％、98.6％、98.2％、97.1％。　　 ⑷以上8个杂交稻品种分别在上海、江西、海南、广西、江苏进行田间小区鉴定，在植株幼苗期至成熟期，通过对植株的典型性状进行观察，将各品种中的异（杂）株区分，田间纯度鉴定结果如下:内5优8015、Y两优689、Ⅱ优7954、钱优1号、株两优06、浙优12、浙优18、春优84等8个杂交稻品种平均纯度分别是97.7％、98.4％、98.3％、97.7％、98.0％、98.9％、99.0％、98.0％。　　 ⑸通过优化种子DNA提取方法和PCR反应体系，对以上8个杂交稻品种种子纯度的SSR分子标记鉴定结果与田间检验结果进行比较发现，SSR分子标记纯度鉴定结果略低于田间鉴定结果，表明分子标记更易区分异（杂）种子，田间小区鉴定难以区分相似的异（杂）株。统计分析结果表明:SSR分子标记纯度鉴定结果与田间检验结果无显著差异。因此，SSR分子标记鉴定方法可用于杂交稻品种纯度的快速鉴定，为企业尽快了解种子质量状况，促进优质种子提早上市具有重要意义。

目录

声明

摘要

引言

1 文献综述

1．1 杂交水稻品种纯度鉴定方法概述

1．2 SSR分子标记技术在杂交水稻纯度鉴定中的研究进展

1．3 SSR分子标记鉴定杂交水稻种子纯度技术要点分析

1．4 SSR分子标记技术在鉴定杂交水稻纯度中的优缺点

1．5 发展前景

1．6 本项目研究的目的与意义

2 杂交水稻种子DNA快速提取方法的优化

2．1 目的与意义

2．2 试验材料

2．3 试验方法

2．3．1 溶液配制

2．3．2 提取方法

2．3．3 DNA检测

2．4 结果与分析

2．4．1 种子浸泡时间

2．4．2 种子离心时间

2．5 小结

3 不同水稻品种特异性SSR引物筛选与PCR体系优化

3．1 目的与意义

3．2 试验材料

3．3 试验方法

3．3．1 引物筛选

3．3．2 PCR扩增

3．4 结果与分析

3．4．1 品种特异性引物筛选

3．4．2 PCR体系优化

3．5 小结

4 品种纯度的SSR分子标记鉴定

4．1 目的与意义

4．2 试验材料

4．3 试验方法

4．4 结果与分析

4．5 小结

5 品种纯度的田间小区检验

5．1 目的与意义

5．2 试验材料

5．3 试验方法

5．4 结果与分析

5．5 小结

6 讨论与结论

6．1 讨论

6．2 结论

参考文献

附录

个人简介

致谢