肿瘤坏死因子-α预处理人脐带间充质干细胞的条件培养基对人脐静脉内皮细胞增殖、凋亡的影响

摘要

目的:探讨100 ng/Ml肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α, TNF-α）预处理人脐带间充质干细胞的条件培养基对人脐静脉内皮细胞增殖、凋亡的影响。　　方法:本实验按计算机随机法将人脐静脉内皮细胞（human umbilical vein endothelia cells，HUVEC）分为对照组、条件培养基组和预处理条件培养基组。首先使用100 ng/Ml TNF-α的内皮细胞培养基刺激HUVEC12 h后，三组培养基分别更换为原培养基、Hucmsc的条件培养基、TNF-α预处理Hucmsc的条件培养基。采用流式细胞仪检测细胞的增殖周期，MTT法测定HUVEC的增殖活性， AO-EB染色和流式细胞仪分别定性、定量检测细胞的凋亡情况。T检验统计分析比较数据。　　结果: MTT的检测结果提示，在培养24、48和72 h时，对照组细胞的吸光度值是0.51、043、0.32，而条件培养基组和预处理条件培养基组吸光度值是0.56、051、0.45和0.59、0.56、0.52；在各个时间点上，条件培养基组和预处理条件培养基组细胞的增殖量均高于对照组，和预处理条件培养基组细胞的增殖量最高。流式细胞仪检测细胞增殖周期（G2/M+S期）的结果示：在培养24、48和72 h时，对照组细胞处于G2/M+S期的比例是(22.34±1.03)、(10.66±1.07)、(9.58±0.82)，而条件培养基组和预处理条件培养基组处于G2/M+S期的比例则分别是(27.95±1.85)、(18.59±1.48)、(13.02±1.91)和(31.17±1.29)、(22.44±2.28)、(16.28±1.11)；在各个时间点上，条件培养基组和预处理条件培养基组处于G2/M+S期的比例均高于较对照组（P值均小于0.05），且预处理条件培养基组升高的更显著(P值均小于0.05)。此外，流式细胞仪定性检测结果表明：在培养24、48和72 h时，对照组细胞的凋亡率是(18.95±1.01)、(16.66±1.51)、(11.37±1.01)，而条件培养基组和预处理条件培养基组细胞的凋亡率分别是[(12.04±1.13)、(10.88±1.39)、(6.88±1.63)]和[(8.16±1.44)、(6.97±1.34)、(2.97±1.44)]；在各个时间点上，条件培养基组和预处理条件培养基组细胞的凋亡率较对照组降低（P值均小于0.05），且预处理条件培养基组细胞的凋亡率最低（P值均小于0.05）。AO-EB定性检测细胞凋亡的结果与流式定量检测的结果趋势类似。　　结论: TNF-α预处理人脐带间充质干细胞的条件培养基可发挥显著促进HUVEC的增殖和抑制HUVEC凋亡的作用。

目录

声明

前言

材料与方法

一、实验材料及主要试剂、仪器来源

二、实验分组

三、MTT法检测HUVEC的增殖活性

四、流式细胞仪检测HUVEC的细胞增殖周期

五、AO-EB染色检测HUVEC的凋亡情况

六、流式细胞仪检测HUVEC的凋亡率

七、统计学处理

结果

一、HUVEC的增殖曲线

二、HUVEC的细胞周期

三、AO-EB染色检测HUVEC的凋亡情况

四、HUVEC的凋亡率

讨论

参考文献

综述:间充质干细胞对创面促血运作用的研究进展

缩略语表

攻读学位期间发表文章情况

个人简历

致谢