S3I--201对化学诱导的肝纤维化和细胞系来源异种移植瘤生长的作用和机制

摘要

本文主要从以下几方面展开论述：　　第一部分 S3I-201在CCl4诱导的肝纤维化模型中发挥抗纤维化作用　　目的:建立CCl4诱导的肝纤维化模型，研究S3I-201在肝内的抗纤维化作用　　方法:将6-7周龄的雌性C57BL/6J小鼠随机分为正常对照组、CCl4组、CCl4+2mg/kgS3I-201组、CCl4+10mg/kgS3I-201组。CCl4+2mg/kgS3I-201组、CCl4+10mg/kgS3I-201组从构模第5周开始每日1次分别按2，10mg S3I-201/kg体重行腹腔内注射，共计2周。正常对照组、CCl4组腹腔内注射补充等体积DMSO。6周后处死小鼠，计算肝体指数，通过病理组织学检查(HE染色、Masson染色、免疫组化染色)明确各组小鼠肝损伤情况和肝内细胞外基质沉积状况。用ELISA法检测各组小鼠血清炎症因子浓度（IFN-γ，IL-1β，IL-6 and TNF-α）反映肝内炎症。检测肝生化指标(ALT、AST、ALP)明确小鼠肝损伤程度。用蛋白免疫印迹法(Westernblot)检测小鼠肝内细胞外基质(α-SMA、fibronectin)表达和信号通路分子（STAT3、p-STAT3、p65、p-p65）表达情况，明确肝纤维程度和S3I-201对STAT3和NFκB信号通路的影响。　　结果:在CCl4诱导的肝纤维化模型中，HE染色显示:Cl4+10mg/kgS3I-201组相对于CCl4组脂肪变性明显改善。Masson染色显示:CCl4+2mg/kgS3I-201组和CCl4+10mg/kgS3I-201组肝组织内的胶原纤维相对于CCl4组均明显减少。10mg/kgS3I-201组较CCL4组肝体指数显著降低。10mg/kgS3I-201组较CCL4组血清转氨酶显著下降。ELISA法示:10mg/kgS3I-201组较CCL4组4种炎症因子均显著降低。另外，2mg/kgS3I-201组较CCL4组IFN-γ和IL-6水平明显下降。免疫组化检测显示:CCl4组肝内α-SMA沉积明显多于正常对照组。Western blot法同样证明CCl4组较正常对照组CCl4肝内α-SMA、纤连蛋白含量明显升高。还发现CCl4+2mg/kgS3I-201组、CCl4+10mg/kgS3I-201组肝内纤连蛋白水平较CCl4组均明显下降。Western blot法检测肝内STAT-3、p65信号通路，发现CCl4+2mg/kgS3I-201组和CCl4+10mg/kgS3I-201组都能减弱p-STAT3和p-p65信号。　　结论:S3I-201作为一种STAT3抑制剂，能有效减缓肝纤维化进程，同时可以抑制NFκB发挥抗炎作用。　　第二部分 S3I-201在HepG2细胞系建立的移植瘤模型中发挥抗肿瘤作用　　目的:建立HepG2细胞系移植瘤模型，研究S3I-201抑制肝癌的作用　　方法:将4-5周龄的雌性BALB/C-nu/nu裸鼠随机分为CDX+equal PBS组，CDX+2mg/kg S3I-201组，CDX+10mg/kg S3I-201组。CDX+2mg/kg S3I-201组、CDX+10mg/kg S3I-201组从细胞移植后第6天起，每日1次分别按2，10mg S3I-201/kg体重行腹腔内注射，共计2周。对照组腹内注射PBS+等浓度DMSO。观察各组移植瘤体积变化。所有小鼠在HepG2接种后第24天麻醉处死。用蛋白免疫印迹法(western blot)检测信号通路分子（STAT3、p-STAT3、p65、p-p65）表达情况，明确S3I-201对STAT3和NFκB信号通路的影响。　　结果:在接种第18天，相对于CDX+equal PBS组，10mg/kg S3I-201治疗就能显著抑制肿瘤生长(Figure5C)。在接种第24天，2mg/kg S3I-201，10mg/kg S3I-201都能显著抑制肿瘤生长。Western blot法检测发现CDX+2mg/kg S3I-201组和CDX+10mg/kg S3I-201组中，p-STAT-3表达明显下调，STAT3下调相对不明显，CDX+2mg/kg S3I-201组和CDX+10mg/kg S3I-201组中，可见p-p65表达显著上调。　　结论:S3I-201作为一种STAT3抑制剂，能有效抑制肿瘤体积的增大，通过抑制STAT3信号通路发挥抗肿瘤作用。

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声明

摘要

缩略词表

前言

参考文献

第一部分S3I-201在CCl4诱导的肝纤维化模型中发挥抗纤维化作用

一、实验材料

二、实验方法

三、实验结果

四、讨论

参考文献

第二部分S3I-201在Hep2细胞系建立的移植瘤模型中发挥抗肿瘤作用

一、实验材料

二、实验方法

三、实验结果

四、讨论

参考文献

综述

致谢