一种蜱源新病毒的发现、分离鉴定及检测方法建立与初步流行调查

目录

声明

摘要

1前言

1．1蜱及蜱的分布

1．2重要的蜱传疾病

1．2．1莱姆病(Lyme borreliosis)

1．2．2埃立克体病(Ehrlichiosis)和无浆体病(Anaplasmosis)

1．2．3立克次体病(Rickettsiosis)

1．2．4巴贝斯虫病(Babesiosis)

1．2．5蜱传脑炎(Tick-borne encephalitis)

1．2．7克里米亚-刚果出血热(Crimean-Congo hemorrhagic fever，CCHF)

1．2．8其他蜱传疾病

1．3楚病毒研究进展

1．4蜱传病毒的检测

1．4．1高通量测序

1．4．2PCR方法

1．4．3血清学方法

1．4．4细胞分离培养

1．5研究的目的与意义

2材料与方法

2．1实验材料

2．1．1细胞

2．1．2蜱、牛、羊和人样本收集

2．1．3主要试剂

2．1．4主要仪器

2．1．5主要溶液的配制

2．2实验方法

2．2．1全基因组获得

2．2．2诺敏病毒生物学特性研究

2．2．3诺敏病毒荧光定量PCR检测方法的建立

2．2．4诺敏病毒巢式PCR检测方法的建立

2．2．5诺敏病毒在不同地区和不同宿主中的流行病学调查

2．2．6诺敏病毒N蛋白原核表达及间接ELISA检测方法的建立

3结果

3．1全基因组的获得

3．1．1宏基因组结果

3．1．2诺敏病毒阳性样本的筛选

3．1．3诺敏病毒全基因组扩增

3．1．4诺敏病毒全基因组比较分析

3．1．5诺敏病毒基因组编码蛋白特性的生物信息学分析

3．1．6诺敏病毒进化分析

3．2诺敏病毒生物学特性研究

3．2．1诺敏病毒细胞培养

3．2．2诺敏病毒培养鉴定

3．2．3诺敏病毒生长曲线

3．2．4诺敏病毒电镜观察和超薄切片制作

3．2．5诺敏病毒免疫荧光实验

3．3诺敏病毒荧光定量PCR检测方法的建立

3．3．1标准品准备

3．3．2荧光定量PCR扩增体系和条件的优化

3．3．3标准曲线的建立

3．3．4特异性检测

3．3．5敏感性试验

3．3．6重复性试验

3．4诺敏病毒巢式PCR检测方法的建立

3．4．1重组质粒的构建

3．4．2巢式PCR退火温度的优化

3．4．3特异性试验

3．4．4敏感性试验

3．4．5重复性试验

3．5．1诺敏病毒在蜱中流行情况

3．5．2诺敏病毒在牛和羊中的流行情况

3．5．3诺敏病毒在病人中的流行情况

3．5．4诺敏病毒在牛、羊和人的载量

3．5．5诺敏病毒病人临床特征分析

3．5．6不同宿主来源诺敏病毒与同科的病毒进化分析

3．6诺敏病毒N蛋白原核表达及间接ELISA检测方法的建立

3．6．1诺敏病毒N蛋白原核表达

3．6．2诺敏病毒间接ELISA检测方法建立

3．6．3临床样本检测

4讨论

4．1新发蜱传疾病与宏基因组测序

4．2诺敏病毒全基因组特征比较分析

4．3诺敏病毒的分离

4．4病毒检测方法

4．5诺敏病毒的流行情况

5结论

致谢

参考文献

攻读博士学位期间发表的学术论文