比较观察六君子汤和启膈散对4NQO诱导C57BL/6小鼠食管癌动物模型生存质量及免疫调节的影响

摘要

目的：　　本实验以健脾和胃代表方六君子汤为研究对象，应用化学致癌剂4NQO诱导小鼠食管癌模型，观察六君子汤对食管癌小鼠生存质量、食管组织病理形态、淋巴细胞亚群、细胞因子的干预作用，并与具有理气化痰作用的治疗食管癌代表方启膈散进行比较，初步探讨健脾和胃法防治食管癌的作用机制，为临床应用提供实验依据。　　方法：　　4NQO用1，2丙二醇配制成2％浓度的母液，再用纯净水配制成100μg/ml的浓度通过饮水法诱导C57BL/6小鼠食管癌模型，六君子组和启膈散组小鼠于造模同时自由饮用六君子汤和启膈散水煎剂16周，实验分组为：A．正常对照组：常规饲料喂养，自由饮用纯净水；B．造模组：常规饲料喂养，饮用100μg/ml4NQO水于避光瓶内自由饮用；C1.六君子组：4NQO造模开始同时饮用六君子汤；C2.启膈散组：4NQO造模开始同时饮用启膈散汤，各组饮用至16周时撤除各药物组（B、C1、C2）的干预因素，四组小鼠均改为正常饮水，每4天观察1次进食及饮水量情况并记录，每周称量1次体重并记录；32周后，各组小鼠摘眼球取血，颈椎脱臼法处死小鼠，解剖获得小鼠食管、肝、肾、脾、心、肺等脏器，称重，计算肝、肾、脾、心、肺脏器指数；取食管组织标本进行肉眼、病理组织学观察；应用BD cyteometric bead array mouse inflammation kit流式细胞仪检测观察六君子汤和启膈散对小鼠外周血中IL-12p70、TNF、IFN-γ、MCP-1、IL-10、IL-6等细胞因子的影响；以及应用流式细胞仪双色标记法检测对小鼠外周血中淋巴细胞亚群（CD3/CD19，CD3/CD4，CD3/CD8）的影响。　　结果：　　1、一般情况：正常组小鼠外形皮毛黑泽光亮，形体匀称，活动正常；造模组皮毛灰暗无光泽，形体明显瘦小，活动明显减弱；六君子组皮毛比较光泽，形体稍瘦小，活动度较正常；启膈散组皮毛比较光泽，形体正常，活动度正常。　　2、体重：正常组1-17周体重不断增加，以后维持在25g左右；模型组1-17周体重不断下降，以后维持在17g左右；六君子汤组1-17周体重不断缓慢增加到23g左右，并维持到23周，以后又缓慢下降；启膈散组1-17周体重缓慢增加到25g左右，以后稍微下降，但终体重在24 g左右。　　3、饮食：正常组饮水量持续波动在4.3mL/日左右，造模组、六君子汤组及启膈散组饮水量第16天后较正常组下降，造模组第100天后饮水量较六君子汤组及启膈散组下降，而六君子汤组及启膈散组饮水量较前平稳有上升趋势；正常组饮食量持续波动在3.2g/日左右，造模组与六君子汤组及启膈散组饮食量较正常组稍低，无明显差异，造模组与六君子汤组、启膈散组相比饮食量近似，食量无明显减少。　　4、食管组织病理形态观察：正常组小鼠食管组织外部形态肉眼可见光滑均匀，无突起肿大表现；造模组食管形态肉眼可见整体不均匀，有突起肿大的表现；六君子组和启膈散组食管和正常组相似，无突起肿大的表现。病理镜下观察正常组食管粘膜上皮基底细胞层、粘膜下层、肌层和外膜层均正常；造模组食管基底细胞层异常增生可见“癌珠”和“病理分裂象”，粘膜下层出现充血，其它均正常；六君子汤组食管基底细胞层异常增生，未见“癌珠”和“病理分裂象”；启膈散组食管基底细胞层有轻度增生，角质层基本消失，其它均正常。　　5、脏器重量和脏器指数：造模组肾、脾、心、肝重量明显低于正常组，具有显著性差异（P<0.05），六君子汤组特别是肝、心和脾重量高于造模组具有显著性差（P<0.05），启膈散组肝和脾高于造模组具有显著性差异（P<0.05）其中启膈散组肝重量高于六君子汤组具有显著性差异（P<0.05）。模型组体重明显低于其他各组，六君子汤和启膈散能明显减轻4NQO引起的体重下降（P<0.05），启膈散作用明显强于六君子汤组（P<0.05）。模型组肾、心、肺指数明显高于正常组具有显著性差异（P<0.05），六君子汤组肾、肺指数低于造模组具有显著性差异（P<0.05），启膈散组肾、心、肺指数低于造模组具有显著性差异（P<0.05），启膈散组肾、心、肺指数低于六君子汤组，具有显著性差异（P<0.05）；六君子汤组和启膈散组肝指数高于造模组具有显著性差异（P<0.05）。　　6、细胞因子：模型组 IL-12p70、IL-6和IFN-γ明显高于正常组具有显著性差（P<0.05），TNF与MCP-1模型组有升高趋势，IL-10有降低趋势没有显著性差异；六君子汤和启膈散组上述6种细胞因子都明显高于正常组（P<0.05），六君子汤组高于启膈散组（P<0.05）。六君子汤组上述6种细胞因子明显高于造模组（P<0.05），启膈散组 IFN-γ低于造模组，IL-10高于造模组。　　7、淋巴细胞分型：与正常组比较，模型组CD3+淋巴细胞明显增加（P<0.05），CD19+淋巴细胞减少趋势，CD3+/CD19+比例有增加趋势，同时 CD3+CD8+淋巴细胞增（P<0.05），CD3+CD4+/CD3+CD8+比例减少（P<0.05）；六君子汤组CD4+/CD8+比例高于造模组（P<0.05），启膈散组CD3+淋巴细胞、CD8+淋巴细胞和CD3+/CD19+比例低于造模组，CD19+淋巴细胞和CD4+/CD8+比例高于造模组（P<0.05）；各指标六君子汤与启膈散和正常组没有差异（P＞0.05）。　　结论：　　1、本次实验4NQO诱导小鼠食管癌模型成功，食管主要病理改变食管基底细胞层出现异常增生，可见“癌珠”和“病理分裂象”，六君子汤防治食管癌具有一定的作用，启膈散作用更明显。　　2、六君子汤和启膈散能够改善4NQO诱导食管癌模型小鼠的生存质量，启膈散组较六君子汤组效果好。　　3、六君子汤和启膈散能够改善4NQO诱导食管癌模型小鼠的肾、脾、心、肝、肺等脏器重量和相应脏器指数的影响。　　4、六君子汤和启膈散能够增加小鼠外周血 IL-12p70、IL-6、IFN-γ、TNF、MCP-1与IL-10细胞因子的水平；六君子汤强于启膈散组。　　5、六君子汤和启膈散可纠正4NQO引起的小鼠体液和细胞免疫障碍。

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缩略词表

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前言

材料与方法

1 实验材料

2 实验方法

3 统计分析

实验结果

1 六君子汤和启膈散对 4-硝基喹啉-1-氧化物诱导食管癌小鼠的生存质量的观察影响

2 六君子汤和启膈散对4NQO诱导食管癌小鼠食管组织病理形态的影响

3 六君子汤和启膈散对4NQO诱导食管癌小鼠脏器重量和脏器指数的影响

4 六君子汤和启膈散对4NQO诱导食管癌小鼠血浆细胞因子的影响

5 六君子汤和启膈散对4NQO诱导食管癌小鼠外周血淋巴细胞分型的影响

讨论

1 中医对食管癌的认识

2 建立食管癌动物模型的条件

3 六君子汤和启膈散对4NQO诱导食管癌小鼠的生存质量的影响

4 六君子汤和启膈散对4NQO诱导食管癌小鼠食管组织病理形态的影响

5 六君子汤和启膈散对4NQO诱导食管癌小鼠血浆细胞因子的影响

6. 六君子汤和启膈散对4NQO诱导食管癌小鼠外周血液淋巴细胞的影响

结论

致谢

参考文献

附录1：附图

附录2 文献综述:中医治未病思想与肿瘤疾病的防治应用

附录3 在校期间论文论著和科研情况