金银花提取物抗菌作用机制的前期研究

摘要

金银花作为传统中药具有广谱抗菌、抗病毒、解热抗炎和增强免疫等多种药理作用。药用价值高,对多种致病性细菌具有抑制作用。金黄色葡萄球菌和大肠杆菌是常见的感染性病原菌,抗生素的广泛使用,使得细菌的耐药性不断增强。由于金银花抑菌性较强,且副作用小,在抗菌方面具有良好的应用前景。因此,本文以祁门生产的金银花提取物为主要药物,研究分析金银花提取物对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌的抑制作用,并对其抑菌机制进行初步探讨研究,为祁门县金银花在新型药抗菌药物和保健食品的开发应用方面提供理论依据。
　　 本文首先利用K-B纸片扩散法检测金银花提取物对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌的抑制效果;在取得明显抑菌效果的基础上,利用稀释法测定金银花提取物对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌的最低抑菌浓度和杀菌浓度;采用MTT法测定活菌数变化,分析金银花提取物和头孢拉定单独和联合作用对细菌成熟生物膜杀伤作用;酶联免疫吸附法测定亚抑菌浓度金银花提取作用后受试菌产生肠毒素的量,分析金银花提取物对细菌产肠毒素能力的影响;通过SDS不连续凝胶电泳和琼脂糖凝胶电泳试验,观察分析金银花提取物对细菌蛋白质和DNA的影响。
　　 结果表明:(1)金银花提取物对细菌具有较强的抑制作用,其中对金黄色葡萄球菌的抑菌圈平均直径＞16mm,最低抑菌浓度为0.225mg/mL,最低杀菌浓度为3.64mg/mL,对大肠杆菌的抑菌圈平均直径＞15.6mm,最低抑菌浓度为0.225mg/mL,最低杀菌浓度为7.27m.g/mL;(2)通过对MTT法测定的活菌数变化数据进行分析,可以看出浓度为2MIC的金银花提取物对两种细菌生物膜均有显著的杀伤作用,在12小时内可使金黄色葡萄球菌和大肠杆菌生物膜内的活菌数分别降低33.3％和41.3％,与头孢拉定联合作用对生物膜破坏作用效果更显著,12小时内两种受试菌生物膜内的活菌数均减少了75％以上;酶联免疫吸附试验结果显示金银花提取物对两种受试菌产生肠毒素的能力有明显影响;(3)经过电泳试验分析可知,金银花提取物能够导致金黄色葡萄球菌和大肠杆菌蛋白质的减少和表达缺失,其中金黄色葡萄球菌蛋白质条带缺失严重,大肠杆菌蛋白质条带总共缺失5条,对DNA也有显著影响,使金黄色葡萄球菌和大肠杆菌DNA含量明显降低,导致部分DNA无法正常复制,电泳图谱显示金黄色葡萄球菌DNA条带缺失2条,大肠杆菌缺失1条。
　　 综上所述,金银花提取物对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌具有较强的抑制作用,其作用机制可能是金银花中的活性成分对细菌细胞内的核酸产生一定的作用,使得DNA复制和RNA合成无法完成,导致蛋白质的合成和表达发生变化,进而起到抑菌作用。

目录

文摘

英文文摘

论文说明:图表目录

致谢

第一章 绪论

1.1 金银花研究进展

1.1.1 金银花的形态特征

1.1.2 金银花地理分布

1.1.3 金银花化学成分

1.1.4 金银花中矿物元素

1.2 金银花的药理作用研究进展

1.2.1 抑菌抗病毒作用

1.2.2 解热抗炎作用

1.2.3 降血糖血脂作用

1.2.4 利胆保肝作用

1.2.5 抗氧化作用

1.2.6 其他作用

1.3 金黄色葡萄球菌论述

1.4 大肠杆菌论述

1.5 主要研究内容和意义

1.5.1 研究意义

1.5.2 主要研究内容

第二章 金银花提取物体外抑菌试验

2.1 试验材料与仪器

2.1.1 试验材料

2.1.2 试验试剂与主要仪器

2.2 试验方法

2.2.1 菌悬液的制备

2.2.2 金银花提取物中绿原酸含量测定

2.2.3 金银花提取物的抑菌作用

2.2.4 液体试管稀释法测定金银花提取液的最低抑菌浓度

2.2.5 最小杀菌浓度测定

2.3 结果分析

2.3.1 金银花提取物中绿原酸含量测定

2.3.2 金银花提取物的抑菌作用

2.3.3 金银花提取液的最低抑菌浓度

2.3.4 金银花提取液的最小杀菌浓度

2.4 讨论

2.5 本章小结

第三章 金银花提取物对生物膜细菌和肠毒素的影响

3.1 材料与仪器

3.1.1 试验材料

3.1.2 试剂与仪器

3.2 试验方法

3.2.1 不同药物单独和联合作用对细菌生物膜的影响

3.2.2 金银花提取物对细菌产肠毒素的影响

3.3 结果与分析

3.3.1 不同药物单独和联合作用细菌生物膜试验结果

3.3.2 金银花提取物对细菌肠毒素的影响

3.4 讨论

3.5 本章小结

第四章 金银花提取物对细菌蛋白质和DNA的影响

4.1 材料与仪器

4.1.1 试验材料

4.1.2 试剂与仪器

4.2 试验方法

4.2.1 试剂配制

4.2.2 受试菌菌体收集及细胞破碎

4.2.3 蛋白质电泳试验

4.2.4 细菌DNA电泳试验

4.3 结论与分析

4.3.1 金银花提取物对细菌蛋白质的影响

4.3.2 金银花提取物对细菌DNA的影响

4.4 讨论

4.5 本章小结

第五章 结论与展望

5.1 结论与展望

5.2 展望

参考文献

硕士期间发表论文