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符号表
目 录
第1章 文献综述
1.1 副猪嗜血杆菌的研究现状
1.1.1 副猪嗜血杆菌的生物学性状
1.1.2 副猪嗜血杆菌流行病学
1.1.3 副猪嗜血杆菌致病机理
1.1.4 副猪嗜血杆菌毒力因子
1.2 副猪嗜血杆菌诊断方法
1.2.1 病原分离培养
1.2.2 血清学方法
1.2.3 分子生物学方法
1.3 副猪嗜血杆菌病的防控与治疗
1.4 环介导等温扩增技术
1.4.1 环介导等温扩增技术概述
1.4.2 LAMP 特点
1.4.3 LAMP 技术在细菌检测中的应用
1.5 立题的背景和意义
第2章 副猪嗜血杆菌的分离与鉴定
2.1 材料
2.1.1 样品来源
2.1.2 主要试剂及培养基
2.1.3 主要试剂和培养基的配制
2.1.4 主要仪器设备
2.2 方法
2.2.1 病料的采集与病原的分离纯化
2.2.2 革兰氏染色
2.2.3 引物设计与合成
2.2.4 分离菌株基因组DNA 的提取
2.2.5 目的基因的扩增
2.2.6 PCR 产物的回收及测序
2.3 结果与分析
2.3.1 病料的采集
2.3.2 副猪嗜血杆菌分离纯化结果
2.3.3 疑似副猪嗜血杆菌革兰氏染色结果
2.3.4 分离菌株的16S rRNA 鉴定结果
2.4 讨论
2.5 小结
第3章 四种血清型副猪嗜血杆菌PCR 检测方法的建立
3.1 材料
3.1.1 菌株
3.1.2 主要试剂
3.1.3 主要试剂及培养基的配制
3.1.4 主要试剂及培养基的配制
3.2 方法
3.2.1 菌株的纯化与培养
3.2.2 细菌基因组的提取
3.2.3 引物设计与合成
3.2.4 PCR 扩增条件及反应体系的建立与优化
3.2.5 PCR 的特异性分析
3.2.6 PCR 的灵敏性分析
3.2.7 重复性试验
3.3 结果与分析
3.3.1 PCR 的特异性分析结果
3.3.2 PCR 的退火温度条件优化结果
3.3.3 引物浓度优化结果
3.3.4 PCR 的灵敏性分析结果
3.3.5 重复性试验结果
3.4 讨论
3.5 小结
第4章 四种血清型副猪嗜血杆菌多重PCR 检测方法的建立
4.1.1 菌株
4.1.2 主要试剂
4.1.3 主要试剂及培养基的配制
4.1.4 主要实验仪器
4.2 方法
4.2.1 菌株的纯化与培养
4.2.2 分离菌株基因组DNA 的提取
4.2.3 多重PCR 引物设计与合成
4.2.4 多重PCR 扩增条件及反应体系的建立与优化
4.2.5 多重PCR 的特异性分析
4.2.6 多重PCR 的灵敏性分析
4.2.7 重复性试验
4.3 结果
4.3.1 多重PCR 的特异性分析结果
4.3.2 多重PCR 的退火温度条件优化结果
4.3.3 多重PCR 引物浓度优化结果
4.3.4 多重PCR 的灵敏性分析结果
4.3.5 多重PCR 的重复性试验结果
4.4 讨论
4.5 小结
第5章 四种血清型副猪嗜血杆菌LAMP 检测方法的建立
5.1 材料
5.1.1 菌株来源
5.1.2 主要试剂
5.2 方法
5.2.1 菌株的活化与纯化
5.2.2 革兰氏染色镜检
5.2.3 细菌基因组提取
5.2.4 引物的设计
5.2.5 LAMP 反应初始体系与程序
5.2.6 LAMP 反应体系的优化
5.2.7 LAMP 反应条件的优化
5.2.8 LAMP 可视化检测分析
5.2.9 敏感性检测
5.2.10 LAMP 方法特异性检测
5.3 结果
5.3.1 LAMP 引物比优化结果
5.3.2 LAMP Mg2+优化结果
5.3.3 dNTP 浓度优化结果
5.3.4 LAMP 反应温度的优化结果
5.3.5 LAMP 敏感性检测
5.3.6 LAMP 特异性检测
5.3.7 LAMP 可视化检测结果
5.4 讨论
5.5 小结
第6章 结论
参考文献
致 谢
攻读硕士学位期间的研究成果
河南科技大学;
