黄蜀葵花总黄酮预处理的脑缺血保护作用及作用机理

摘要

缺血预处理(Ischemic preconditioning，IP)是指预先短暂性缺血或轻度缺氧后激发或动员机体内在的防护能力，使机体对随后严重的缺血、缺氧产生防御和保护现象。而药物预处理(pharmacological preconditioning，PP)是通过药物模拟缺血预处理激发机体内源性物质，如腺苷、NMBA受体阻断剂等而发挥保护作用。PP的研究开辟了脑保护研究的一个新领域。黄蜀葵花总黄酮(total flavones ofAbelmoschl Manihot，TFA)是锦葵属植物黄蜀葵的花中提取的有效部位。本室曾发现TFA药理性预处理(pharmacological preconditioning of TFA，PPA)对大鼠心肌缺血再灌注损伤有保护作用，但未见PPA对脑缺血再灌注损伤影响的研究报道，因此，本研究就PPA对脑缺血再灌注损伤的影响及其机制进行了初步研究。主要研究结果如下： 1．PPA早期相对大鼠脑缺血再灌注损伤的影响PPA(20，40，80，160 mg·kg<'-1>)3Gmin对大鼠MCAO 9Cmin致缺血后脑梗死体积百分比增高有明显的抑制作用，可不同程度的降低血清中乳酸脱氢酶(lactatedehydrogenase,LDH)的活性、丙二醛(methylenedioxyamphetamine，MDA)、前列腺素 E<,2>(Prostaglandin E<,2>，PGE<,2>)的含量，同时升高一氧化氮合酶(nitric oxide synthase，NOS)的活力及血清中一氧化氮(nitric oxide，NO)的含量。 2．PPA中间时相预处理对大鼠脑缺血再灌注损伤的影响PPA(80，160 mg·kg<'-1>)7h对大鼠MCAO 90min致脑梗死体积百分比增高无明显的影响。 3．PPA延迟相预处理对大鼠脑缺血再灌注损伤的影响PPA(20，40，80，160 mg·kg<'-1>)36h对大鼠MCAO 90min致缺血后脑梗死体积百分比增高有明显的抑制作用，不同程度的降低血清中LDH的活性，MDA的含量，同时升高血清中一氧化氮的含量，其中160 mg ·kg<'-1> PPA能显著提高脑组织中iNOSmRNA的表达。 4．PPA对小鼠脑缺血再灌注损伤的影响小鼠PPA(25，50，100，200 mg·kg<'-1>)30min时对MCAO 90min致脑梗死体积百分比增高有明显的抑制作用，不同程度的降低血清中LDH、小鼠神经特异性烯醇化酶(nervous specific enolase，NSE)的活性及MDA的含量，同时升高血清中NO的含量。 5．内皮依赖性超级化因子(Endothelium-derived hyperpolarizing factor，EDHF)在海马神经元缺氧复氧损伤的作用海马神经元培养至第8天，加入乙酰胆碱(Acetylcholine，Ach)和一段3mm脑基底环动脉后后行缺氧4h复氧24h．结果表明Ach(1μmol·L-1)+血管明显地抑制缺氧复氧后海马神经元活力的降低，同时能显著降低培养上清液中的LDH活性，但Aeh及血管段单独均没有作用。加入前列腺环素(PGI<,2>)合成酶抑制剂吲哚美辛(indomethacin，Indo)及NO合酶抑制剂左旋硝基精氨酸甲酯(Nω-nitro-L-arginine-methyl-ester,L-NAME)预处理对Ach合用血管的作用无明显的影响，提示Ach介导的血管内皮EDHF释放对神经细胞缺氧再给氧损伤有保护作用。 6．TFA对海马神经元缺氧复氧损伤的影响及可能的EDHF机制与单独应用TFA比较，联合使用 TFA(3，10，30，100mg/L)和血管对缺氧复氧后海马神经元的活力有明显的升高作用，同时降低培养上清液中LDH的活性和海马神经元细胞内的游离 Ca<'2+>的增高。加入Indo及L-NAME预处理对TFA的保护作用无明显的影响，提示TFA对缺氧复氧致神经细胞损伤有一定的保护作用，其机制可能与EDHF有关。 结论：TFA 药理性预处理对脑缺血再灌注损伤有明显的保护作用，其机制可能与减轻细胞膜脂质过氧化、增加NO的牛成、降低细胞内钙离子超载及释放EDHF等有关。

目录

论文说明：英文缩略词表

声明

综述 药物预处理的脑保护作用

1前言

2实验材料

2.1实验动物

2.2药品与试剂

2.3实验仪器

3实验方法

3.1大鼠大脑中动脉线栓法

3.2小鼠MCAO模型

3.3海马神经元培养原代培养法

3.4各项生化指标的测定

3.5iNOS mRNA表达检测的RT-PCR技术

3.6 MTT法测定海马神经元的活力

3.7激光共聚焦测定细胞内游离Ca2+浓度

3.8统计学方法

4实验结果

4.1 TFA预处理早期时相对大鼠脑缺血再灌注损伤的影响

4.2 TFA中间时相预处理对大鼠脑缺血再灌注损伤的影响

4.3 TFA预处理延迟时相对大鼠脑缺血再灌注损伤的影响

4.4TFA预处理早期时相对小鼠脑缺血再灌注损伤的影响

4.5TFA对海马神经元缺氧再给氧损伤的影响

5讨论

6结论

参考文献

附录

致谢