Survivin、Livin在胃癌中的表达及SiRNA干扰Survivin基因诱导胃癌BGC-823细胞凋亡的研究

摘要

目的：探讨胃癌(GC)组织中凋亡抑制因子Survivin、Livin表达及其与bc1-2、Ki-67增殖指数和临床病理因素之间的关系；观察Survivin、Livin在胃癌细胞株BGC-823、SGC-7901中的表达；观察SiRNA干扰Survivin基因表达对人胃癌细胞株BGC-823细胞的Survivin蛋白表达及细胞凋亡率的影响。　　方法：本研究分为两个部分。第一部分：采用免疫组化S-P法检测70例胃癌、48例癌旁黏膜组织中Survivin、Livin、Bcl-2、Ki-67的表达，分析Survivin、Livin的表达与临床病理因素、预后、Ki-67增殖指数和bcl-2的关系；采用细胞免疫化学S-P法检测胃癌细胞株BGC-823、SGC-7901中Survivin、Livin蛋白的表达；第二部分：以脂质体lip-2000为载体，用针对Survivin特异靶点的SiRNA转染入人胃癌细胞株BGC-823细胞后，用免疫细胞化学SP法、Western Blot检测Survivin蛋白表达变化，并采用TUNEL法检测SiRNA转染及SiRNA转染联合5-Fu作用前后细胞凋亡率的变化。 　　结果：第一部分：(1)免疫组化结果显示：Survivin、Livin在胃癌细胞的胞核或(和)胞质高表达，胃癌组织N-Survivin、C-Survivin高表达率均为28.57％；N-Livin、C-Livin高表达率分别为42.86％、40％；Bc1-2在胃癌细胞的胞质表达，阳性率为52.86％；胃癌组织中Survivin、Livin、Bc1-2的阳性表达率均显著高于癌旁胃黏膜(P<0-01)；(2)C-Survivin表达在高、中、低分化腺癌间差异有显著性(P<0.05)；C-Survivin表达在乳头状腺癌与差分化腺癌之间的差异有显著性(P<0.01)；C-Survivin、N-Survivin高表达率均与胃癌远处转移呈正相关(P<0.05)；N-Survivin高表达与胃癌的浸润生长呈正相关性(P<0.05)：C-Livin表达在高、中、低分化腺癌间差异有显著性(P<0.05)；C-Livin表达在差分化腺癌及黏液腺癌与乳头状腺癌之间差异有显著性(P<0.05)；Bc1-2阳性表达与胃癌的TNM分期呈负相关(P=0.05)；(3)N-Survivin高表达组的5年生存率(40％)明显低于Survivin核阴性和低表达组(66％，P=0.04)；(4)70例GC组织Ki-67指数为34.47±24.58，显著高于癌旁胃黏膜组织(P<0.01)；N-Survivin、N-Livin高表达组、弱表达组Ki-67指数均明显高于无表达组，差异均有显著性(P<0.05)；(5)Survivin、Livin及Bc1-2之间两两分析，发现三者表达之间均无相关性；(6)多因素COX回归分析，仅临床TNM分期对胃癌患者有预后意义(P<0.05)；(7)免疫细胞化学结果显示：BGC-823和SGC-7901细胞的胞质和胞核均可表达Survivin和Livin蛋白。第二部分：免疫细胞化学)~Western Blot结果:显示：Survivin.SiRNA转染BGC.823~48小时后，Survivin蛋白表达被明显抑制。TUNEL检测结果显示：Survivin蛋白表达抑制促进BGC-823细胞凋亡，SiRNA联合5.Fu~BGC.823细胞对凋亡的敏感性。　　结论：(1)Survivin、Livin和Bc1-2在胃癌组织中均高表达，各自在胃癌发生发展的不同阶段独立地发挥作用；N-Survivin高表达与胃癌细胞的增殖、转移密切相关，可作为判断胃癌恶性程度和预后的标志。(2)Survivin和Livin在胃癌细胞株BGC-823、SGC-7901的胞质和胞核均表达。(3)Survivin-SiRNA可有效沉默人胃癌细胞株BGC-823细胞Survivin基因表达，促进细胞凋亡，联合5-Fu可增强细胞对凋亡的敏感性。

目录

论文说明：英文缩略词表

声明

第一部分 凋亡抑制因子Survivin和Livin在胃癌中的表达及与bcl-2、Ki-67的关系

1.前言

2.材料与方法

3.结果

4.讨论

5结论

参考文献:

第二部分 SiRNA干扰Survivin基因诱导胃癌BGC-823细胞凋亡的实验研究

1前言

2材料与方法

3结果

4讨论

5结论

6问题与展望

参考文献：

附图

附录 个人简历

致谢

综述 凋亡抑制因子Survivin和Livin在胃癌中的研究现状及时展