特异性IgM和IgG4抗体联合检测及基于IgY的双抗体夹心ELISA法在日本血吸虫病诊断中的应用

摘要

目的：利用本实验室制备并纯化的重组蛋白rSj14-3-3、rSjGST和可溶性虫卵抗原 (SEA)，建立间接ELISA方法(SjSEA-ELISA、rSj14-3-3-ELISA及rSjGST-ELISA)，探讨联合检测血清特异性IgM和IgG4对日本血吸虫病的诊断及疗效考核的价值。利用抗可溶性虫卵抗原 (SEA) 卵黄抗体 (IgY)和酶标抗SEA单克隆抗体NP28-5B组合建立双抗体夹心ELISA方法 (S-ELISA) 用于湖沼型疫区人群日本血吸虫病诊断的效果研究。
　　 方法：用Lowry法检测包被物的含量，将SEA、rSj14-3-3和rSjGST以及抗可溶性虫卵抗原 (SEA) 卵黄抗体 (IgY) 分别包被酶标反应板，用棋盘滴定法确定最适抗原或抗体包被量以及血清稀释度，分别建立三种间接ELISA 法 (SjSEA-ELISA、rSj14-3-3-ELISA和rSjGST-ELISA) 以及双抗体夹心ELISA (S-ELISA)。间接ELISA法检测急性血吸虫病、慢性血吸虫病及慢性血吸虫病患者治疗12月、24月后血清特异性IgM和IgG4的抗体变化，并比较重组蛋白SEA包被的三种间接ELISA方法间敏感性和特异性。以改良加藤厚涂片法 (Kato-Katz法) 检测结果为金标准，采用S-ELISA方法检测我省某疫区少年血清循环抗原，并同时用SEA-IHA检测循环抗体，比较两者敏感度和特异性。
　　 结果：SjSEA-ELISA检测时，急性血吸虫病患者特异性IgM和IgG4阳性率分别是100％、87.9％，慢性血吸虫病患者特异性IgM和IgG4阳性率分别是45.5％、68.2％，联合检测急性血吸虫病和慢性血吸虫病患者特异性IgM和IgG4阳性率分别是100％和75.8％，慢性血吸虫病患者治疗12月、24月后特异性IgG4阳性率分别是16％、5％；rSj14-3-3-ELISA检测时，急性血吸虫病患者特异性IgM和IgG4阳性率分别是77.6％、60.3％，慢性血吸虫病患者特异性IgM和IgG4阳性率分别是30.3％、48.5％，联合检测急性血吸虫病和慢性血吸虫病患者特异性IgM和IgG4阳性率分别是86.2％和54.5％，慢性血吸虫病患者治疗12月、24月后特异性IgG4阳性率分别是12％、2.5％；rSjGST-ELISA检测时，急性血吸虫病患者特异性IgM和IgG4阳性率分别是72.4％、55.1％，慢性血吸虫病患者特异性IgM和IgG4阳性率分别是37.9％、50.0％，联合检测急性血吸虫病和慢性血吸虫病患者特异性IgM和IgG4阳性率分别是81.0％和56.1％，慢性血吸虫病患者治疗12月、24月后特异性IgG4阳性率分别是14％、2.5％。检测疫区少年174例，Kato-Katz法、S-ELISA和SEA-IHA阳性率分别是6.90％、22.41％和15.52％，经χ2 检验，p<0.01，差异有显著性；S-ELISA和SEA-IHA敏感度和特异度比较，经χ2 检验，两者均p>0.05，差异无显著性；三种方法各自男生与女生检出率比较，差异均无统计学意义。
　　 结论：检测血清特异性IgG4对日本血吸虫病有一定的疗效考核价值；并联检测特异性IgM和IgG4对急性血吸虫病早期诊断具有较好的应用价值。S-ELISA诊断血吸虫病具有较好的敏感度和特异性，可以用于疫区筛查血吸虫病。