子宫平滑肌收缩及其输电网发子在子宫腺肌病致痛机制中的作用

摘要

背景：子宫腺肌病(adenomyosis，AM)已成为危害妇女健康的主要疾病之一。AM的主要临床表现是月经量增多和经期延长，以及逐渐加剧的进行性痛经。痛经作为AM的第二大症状，其发生机制目前仍不清楚。AM的腹腔疼痛是一种内脏痛觉，有证据提示痛经与其子宫平滑肌异常收缩密切相关。正常子宫收缩在月经期和排卵期最剧，而AM患者的腹腔疼痛在月经期最剧，这中间绝不仅仅是巧合。本课题研究AM的子宫收缩情况以及相关分子表达的变化，探讨AM疼痛发生机制。　　 第一部分催产素受体在子宫腺肌病患者子宫平滑肌细胞中的表达情况　　 目的：探讨AM患者MSMC(myometrial smooth muscle cells，MSMC)催产素受体(oxytocin receptor，OTR)的表达情况，以及曲古抑菌素A(Trichostatin A，TSA)和穿心莲内酯(Andrographolide，Andro)对OTR表达的影响。方法：选取20例AM患者，作为病例组。另选10例非AM患者作为对照组。采用视觉模拟评分法(visual analogue scale，VAS)评价患者痛经程度。原代培养两组的MSMC，采用realtime PCR和Western Blot方法比较两者OTR在mRNA和蛋白水平表达的差异。用不同浓度组蛋白去乙酰化酶抑制剂TSA和NF-κB抑制剂Andro分别处理病例组的MSMC，检测处理前后OTR在mRNA和蛋白水平表达的改变。结果：AM患者OTR表达明显高于对照(p<0.01)，且与VAS评分相关，相关系数是0.746。TSA和Andro均可以抑制病例组MSMC的OTR表达。结论：OTR表达增高与AM痛经的发生有关。而且，结果提示组蛋白去乙酰化酶抑制剂和NF-κB抑制剂可能对AM的痛经有治疗作用。　　 第二部分体外检测子宫腺肌病子宫平滑肌收缩情况　　 目的：探讨AM子宫平滑肌组织体外收缩情况，分析其与AM腹腔疼痛的关系。方法：病例组和对照组的选取，如前所述。VAS评价患者痛经程度。所有子宫平滑肌肌条均在手术后尽快收集。体外使用生理记录仪检测AM与对照子宫平滑肌肌条收缩情况。分别计算各患者子宫收缩的频率和振幅，并与OTR表达及VAS评分进行相关性分析。结果：AM子宫平滑肌收缩振幅大于对照组，与OTR表达和VAS评分相关，相关系数分别是0.672和0.601。结论：AM子宫收缩振幅增高可能与AM的腹腔疼痛发生有关。　　 第三部分一些候选药物对小鼠子宫腺肌病模型的治疗作用　　 目的：观察一些候选药物对小鼠AM模型的治疗作用。方法：通过对新生小鼠给予一定量的他莫西芬干预，诱导小鼠AM模型。模型组小鼠于4月龄始随机分组，治疗组给予药物处理。在治疗前后，分别热板试验观测治疗前后小鼠的热板痛阈时间。最后一次热板实验结束后，处死小鼠，取其子宫，检测其体外收缩情况，并用HE染色比较治疗组与非治疗组小鼠子宫的病变情况。结果：治疗组小鼠热板痛阈时间有所改善，HE染色显示病变对肌层侵润也得到抑制，子宫收缩振幅也降低。结论：这些药物能改善AM模型小鼠的痛觉和子宫收缩，是治疗AM的前景药物。　　 第四部分一些候选药物治疗小鼠子宫腺肌病模型时相关分子表达情况　　 目的：观察一些候选药物处理后，小鼠AM模型子宫和DRG组织的相关分子表达情况，探索这些药物治疗AM小鼠模型的机制。方法：免疫组化方法检测子宫CGRP、HDAC2、NGF、OTR、p-p65、TRPV1和DRG组织ASIC3、c-fos、CGRP、NGF、P2X3、TrkA、TRPV1、NMDAR1的表达。结果：各治疗组子宫组织CGRP、HDAC2、NGF、OTR、p-p65和TRPV1的表达水平均低于模型未治疗组(p<0.01)。各治疗组DRG组织ASIC3、c-fos、CGRP、NGF、P2X3、TrkA、TRPV1和NMDAR1的表达水平均低于模型未治疗组(p<0.01)。所有指标都是在U组表达最高，C组表达最低，各药物治疗组的表达与U组相比均有所降低。结论：这些药物是潜在的治疗AM有效药物。