上海地区发病山羊中D群链球菌的分离与鉴定

摘要

链球菌病是由链球菌属细菌引起的多种动物不同疾病的总称,链球菌病分布广泛,世界各地均有发生,是多种家畜易感的传染病,常见的有猪链球菌病、羊链球菌病、马腺疫以及禽链球菌病等,人类亦可感染本病。链球菌病在我国的发病和死亡呈上升趋势,并成为一些病毒性疾病的继发病,给我国畜牧业生产造成了较大的经济损失,并且某些血清型的链球菌(如猪链球菌2型)能引发特定人群感染和死亡,在公共卫生领域的影响也越来越大。近年来,随着养羊业快速发展,羊链球菌病成明显上升趋势,主要由溶血链球菌所引起羊的急性热性败血性传染病,临床上以全身出血性败血症及浆液性肺炎与纤维素胸膜肺炎、脑膜炎为特征,少数以关节炎型为特征,且常与其它病原菌合并感染,发病率、死亡率仅次于猪,给养羊业带来极大危害。2009年初,上海某羊场饲养的山羊相继发生了以高热、败血症和咽喉肿胀为主要特征的传染病。通过剖检和镜检初步认为是羊链球菌病,随即采集病料进行细菌培养,从发病羊只中分离到15株细菌,通过对分离细菌的形态特征、培养特性、生化特性及致病特性等进一步检测,确认该分离菌为链球菌。为了进一步确定山羊败血性链球菌病的病原,研究其生物学特性,进行了链球菌的分型鉴定。通常认为羊链球菌病是由C群溶血性链球菌引起的,而本试验通过VITEK-32全自动微生物分析仪分离鉴定出的菌株属于D群链球菌(粪肠球菌),该菌革兰氏染色阳性,α溶血,瑞氏染色可见荚膜,大多呈短链状。通过PCR反应和基因测序证实属于D群链球菌,并检测到致病基因cylA,这是上海地区首次分离到具有致病力的D群链球菌。

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摘要

ABSTRACT

符号说明

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第一章 文献综述

1 链球菌的分类地位

2 链球菌的生物学特征

2.1 形态及染色

2.2 培养特征和保存条件

2.3 生理生化特征

2.4 抗原构造

2.5 分类

2.6 抵抗力

3 流行病学

3.1 流行的基本状况

3.2 传染源、传播途径、感染范围和感染与季节的关系

3.3 致病性及对动物的危害

3.4 临床症状

3.5 剖检变化

4 致病机理

4.1 致病物质

4.2 致病类型

4.3 免疫性

5 诊断方法的研究

5.1 微生物学检查法

5.2 生化检测金标法

5.3 免疫学检测法

5.4 PCR 技术

6 预防、控制和治疗方法

6.1 预防和控制

6.2 治疗方法

7 目前存在的问题和本研究的目的和意义

7.1 目前存在的问题

7.2 本研究的目的和意义

第二章 试验部分

引言

1 材料

1.1 检测样品

1.2 主要仪器和设备

1.3 培养基和试剂

2 方法

2.1 试验设计方案

2.2 细菌培养及镜检

2.3 链球菌属常规生化试验及血清群鉴定

2.4 VITEK-32 全自动微生物分析鉴定

2.5 PCR 检测方法

2.6 动物试验

3 结果

3.1 细菌分离培养

3.2 生化试验结果及血清群鉴定结果

3.3 VITEK-32 鉴定结果

3.4 PCR 试验结果

3.5 动物试验结果

4 讨论

4.1 关于山羊群的发病

4.2 关于羊链球菌的分群鉴定

4.3 关于双重PCR 检测方法的建立

4.4 关于溶血基因cylA 的检测

5 结论

参考文献

致谢

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