预测清髓性非血缘脐血移植后急性移植物抗宿主病发生风险以及预后的相关生物标记物研究

摘要

目的：急性移植物抗宿主病（Acute graft-versus-host disease，aGVHD)是异基因造血干细胞移植后早期主要并发症和死亡原因，但目前还没有可信的方法来预测它的发生及其对预后的影响，本研究通过监测清髓性非血缘脐血移植后患者外周血生物标记物ST2、elafin和REG-3α血清水平来对照分析临床aGVHD发生情况。
　　方法：本研究选择2013年7月至2014年7月在安徽医科大学附属省立医院血液科接受非血缘脐血移植的恶性血液病患者作为研究对象，采用清髓性预处理方案，收集患者移植后5天、14天和30天的外周血标本各5ml，样本收集后1500RPM离心8min，储存于-80℃冰箱中备用。用ELISAs方法检测患者外周血血清中的生物学标记物ST2、elafin和REG-3α的浓度变化，并对照患者移植后aGVHD的发生情况，并根据aGVHD在各时间点发生与否将患者分为两组，分别比较这两组患者生物标记物的浓度有无统计学意义。
　　结果：
　　1.总共有43例患者接受脐血移植，植入43例。中性粒细胞植入时间为脐血移植术后18天。血小板植入的中位时间为脐血移植后46天。43例患者中，有23例于脐血移植术后15到96天之间发生aGVHD，发生率为53.5％。在发生aGVHD的23例患者中，Ⅰ-Ⅱ度有14人，Ⅲ-Ⅳ度有9人，中位发生时间为脐血移植术后27天。在发生急性移植物抗宿主病的这23例患者中，14/23例(61%)患者对激素治疗反应良好，9/23例(39%)患者对激素抵抗采用了二线治疗。移植后早期并发症如血流感染、迟发型出血性膀胱炎、移植相关微血管病（HSCT-associated thrombotic microangiopathy，TMA）和巨细胞病毒感染率分别为30.2%、34.9%、4.7%和65.1%。
　　2.ST2的浓度于脐血移植术后第5天、14天和30天进行监测。发生aGVHD的患者在脐血移植术后第14天（发生组280pg/ml，未发生组90pg/ml）和第30天（发生组340pg/ml，未发生组130pg/ml）血清中ST2水平较为发生者明显升高（P=0.022和P=0.007）；然而，两组在脐血移植术后第5天 ST2水平（发生组128pg/ml，未发生组203pg/ml）与急性移植物抗宿主病之间无统计学意义（P=0.38）。按照aGVHD发生的严重程度将其分为3组：I-II度、III-IV度和未发生组。研究发现，脐血移植后第14天和第30天ST2浓度在III-IV级组分别为600pg/ml和500pg/ml，比另外两组均高，脐血移植术后第14天ST2水平III-IV级组显著高于I-II级组（P=0.001），I-II级组和未发生组之间均无统计学差异（P=0.301，P=0.092）。脐血移植术后第14天高ST2组与低ST2组移植后6个月非复发死亡率分别为32.6%和4.4%（P=0.003）。
　　3.14/21例脐血移植患者发生皮肤aGVHD。移植后第5天、第14天和第30天患者血清 elafin的水平分别为13.8pg/ml，12.05pg/ml，6.65pg/ml。移植后第14天发生皮肤aGVHD患者血清elafin水平明显升高（P=0.028），但是移植后第5天和第30天两组之间血清elafin水平无统计学意义（P=0.185，P=0.732）。
　　4.11/43例患者发生肠道aGVHD，移植后第5天、第14天和第30天患者血清中REG-3α水平分别为0.4ng/ml，1.65 ng/ml，0.9 ng/ml。研究发现，在每个时间点发生肠道aGVHD和未发生的患者REG-3α水平分别为0.4ng/ml和0.9ng/ml，1.65 ng/ml和1.2ng/ml，0.9 ng/ml和0.8ng/ml。在三个时间段两组比较均无统计学意义（P=0.698，P=0.07和P=0.502）。而发生肠道aGVHD患者组在移植后第14天血清REG-3α水平较未发生者有升高趋势。REG-3α水平与发生肠道aGVHD的等级无统计学意义。
　　结论：
　　1.清髓性非血缘脐血移植术后患者外周血血清中ST2、elafin水平可以作为预测急性移植物抗宿主病的发生的生物学标记；移植后第14天患者血清REG-3α水平在发生肠道aGVHD的患者中有升高趋势，但需要扩大病例数进一步证实。
　　2.非血缘脐血移植术后第14天患者外周血血清中ST2水平与移植后6个月非复发死亡相关。

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1.引言

1.1异基因造血干细胞移植的作用及目前存在的问题

1.2 移植物抗宿主病（GVHD）的发生及意义

1.3移植物抗宿主病（GVHD）的诊断

1.4 清髓性不含抗人体胸腺细胞球蛋白（ATG）方案的非血缘脐血移植（UCBT）后免疫重建和GVHD

2.临床资料

2.1病例选择

2.2移植物的选择

2.3预处理方案

2.4 GVHD的预防

2.5移植相关并发症的防治

3.材料与方法

3.1 ELISA实验检测材料

3.2造血重建的检测和定义

3.3研究对象外周血血清细胞因子浓度检测

3.4统计学分析

4. 结果

4.1造血重建情况及移植物抗宿主病发生情况

4.2 感染发生情况

4.3 脐血移植术后患者外周血ST2浓度变化

4.4. 脐血移植术后患者外周血elafin浓度变化

4.5 脐血移植术后患者外周血REG-3α浓度变化

5.讨论

6. 展望下步研究

7. 结论

参考文献

7.附录

致谢

综述： 造血干细胞移植后预测移植物抗宿主病发生的相关生物标记研究进展