肿瘤患者弓形虫感染的血清学调查及虫株基因型分析

摘要

材料与方法：
　　采用ELISA检测安徽地区356例肿瘤患者血清中抗弓形虫IgG和IgM抗体；抽提抗体阳性者全血DNA，以弓形虫529bp高度重复序列为靶基因进行PCR检测，阳性标本选择10个位点经聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性分析（PCR-RFLP）进行基因型分析,对照ToxoDB分型数据库，确定我国人体感染弓形虫的基因型；以完整分型的弓形虫DNA基因组为模板，PCR扩增Chinese1型的2个重要毒力相关的效应分子ROP16和GRA15，并测序，观察其多态性特征。
　　结果：
　　ELISA检测肿瘤病人血清中抗弓形虫IgG和IgM抗体，其中，IgG抗体阳性标本21例（阳性率为5.90％）；IgM抗体阳性标本8例（阳性率为2.25%）。总抗体阳性率为6.74%。抗体阳性者同时进行PCR检测，结果6例呈阳性，阳性率为20.69%。对PCR阳性标本进行PCR-RFLP分型，2例获得完整分型条带，并鉴定为Chinese1型（ToxoDB＃9）。
　　对Chinese1基因型的两个重要毒力相关因子ROP16和GRA15的PCR扩增和测序见到，Chinese1基因型的人体感染弓形虫毒力因子ROP16第503位氨基酸为503L，与I型和III型的ROPI/III相同；而GRA15在519-602位氨基酸出现大片段缺失，亦即均为II型虫株的GRA15II的多态性特征。
　　结论：
　　肿瘤患者接受长期化疗存在弓形虫的隐性感染和活动性感染,表现为血清抗体阳性和Toxo-DNA阳性；血清学总阳性率为6.74%，与普通人群的隐性感染率相近；人体感染虫株基因型为Chinese1型，与动物体内分离虫株基因型一致。以上提示我国人体弓形虫感染来源于动物；Chinese1基因型虫株具有同原型谱系虫株不同的致病机制。

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中英文缩略词对照表

中文摘要

英文摘要

1. 前言

1.1 弓形虫与弓形虫病

1.2 我国弓形虫感染状况

1.3 弓形虫的基因分型

2. 材料与方法

2.1 材料

2.2 主要试剂的配制

2.3 方法

2.4 患者外周血中TOXO基因组DNA提取与TOXO-529bpDNA片段的检测

2.4 统计学方法

3 结 果

3.1 安徽地区6家三甲医院肿瘤患者的年龄分布和弓形虫抗体阳性率

3.2 肿瘤患者血清中抗弓形虫IgG和IgM抗体检测

3.3 人体感染的弓形虫的PCR-RFLP基因分型

3.4 我国人体感染Chinese 1基因型虫株效应分子GRA15和ROP16的多态性

4 讨 论

5 展望

参考文献

附录1 个人简历

致谢

综述： 全球弓形虫分离株的遗传结构及其主要效应分子相关的致病机制研究