食管鳞状细胞癌中纤维连接蛋白和层黏连蛋白的过度表达与肿瘤微血管密度和肌成纤维细胞数量的关系及临床意义

摘要

背景和目的：食管鳞状细胞癌（Esophageal squamous cell carcinoma，ESCC）是侵袭力最强的消化道肿瘤之一，虽然其治疗手段不断完善，但疾病控制率及患者预后仍然不佳，85％以上的患者在术后5年内出现淋巴结及远处器官转移。加强食管鳞状细胞癌侵袭转移机制的研究成为改善患者预后的关键之一。纤维连接蛋白（Fibronectin，FN）和层黏连蛋白（Laminin，LN）作为重要的细胞外基质糖蛋白在正常组织上皮基底膜上形成完整的片状连续结构，多线证据表明 FN和 LN的多种亚型也广泛分布于肿瘤组织中，在肿瘤发生发展过程中发挥多向作用。食管鳞状细胞癌间质丰富，肿瘤血管生成为癌细胞的生长、浸润和转移提供营养支持和有利环境。肌成纤维细胞作为肿瘤间质中的重要成分可通过为肿瘤细胞提供免疫保护，参与肿瘤微环境重构等作用促进肿瘤发展。本实验旨在探究食管鳞状细胞癌中FN和LN的表达水平及其与肿瘤微血管密度（Microvessels density，MVD）和肌成纤维细胞（Myofibroblast，MF）数量的关系，通过分析FN和LN表达水平对肿瘤恶性程度及患者生存情况的影响评估其作为食管鳞状细胞癌诊疗靶点的意义和应用价值。
　　方法：采用免疫组织化学（Immunohistochemistry，IHC）方法测定53例食管鳞状细胞癌组织和相应癌旁组织中FN和LN的蛋白表达水平，利用CD34和α-平滑肌肌动蛋白（α-Smooth muscle actin，α-SMA）分别标记肿瘤微血管内皮细胞和肌成纤维细胞。Spearman’s相关分析用于检验肿瘤组织中FN和LN的表达水平与微血管密度和肌成纤维细胞数量的相关性。Kaplan-Meier生存分析和Cox回归模型用于分析 FN和 LN在食管鳞状细胞癌组织中的过度表达与样本临床病理特征的关系及其对患者预后的影响。
　　结果：FN和LN在食管鳞状细胞癌中的表达较癌旁正常组织显著升高，FN的阳性率为96.2%（χ2=17.162，P=0.000），LN的阳性率为52.8%（χ2=23.277，P=0.000）。它们的表达水平分别与肿瘤微血管密度（FN：P=0.008；LN：P=0.039）和肌成纤维细胞数量（FN：P=0.016；LN：P=0.023）正向相关，与食管鳞状细胞癌TNM分期（FN：P=0.000；LN：P=0.004）和血管侵犯（FN：P=0.002；LN：P=0.011）关系密切。生存分析显示 FN和 LN高表达组患者的总体生存率下降且具有统计学意义（FN：P=0.005；LN：P=0.004），无病生存率未见显著改变。但 FN和 LN在食管鳞状细胞癌组织中的过度表达在本实验样本中尚不能作为患者总生存期的独立预后因子（FN：P=0.201；LN：P=0.142）。
　　结论：FN和LN在食管鳞状细胞癌中过度表达，与肿瘤微血管密度和肌成纤维细胞数量密切正相关，其通过参与改变肿瘤间叶组织成分和结构为肿瘤细胞浸润转移创造有利环境，在一定程度上促进肿瘤发展，影响患者预后。

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1 引言

2 材料与方法

2.1 标本来源及处理

2.2 试剂

2.3 仪器设备

2.4 免疫组化染色步骤

2.5 免疫组化染色结果判定

2.6 统计学方法

3 结果

3.1 FN和LN在食管鳞状细胞癌组织和相应癌旁正常组织中的表达情况

3.2 FN和LN在食管鳞状细胞癌组织中的表达水平与肿瘤微血管密度及间质肌成纤维细胞数量的关系

3.3 FN和LN在食管鳞状细胞癌组织中强表达的临床病理学意义

3.4 生存分析

4 讨论

4.1 食管鳞状细胞癌组织中肿瘤微血管的分布

4.2 食管鳞状细胞癌组织中间质肌成纤维细胞的分布

4.3 FN和LN在食管鳞状细胞癌组织中过度表达

4.4 食管鳞状细胞癌组织中FN和LN的表达水平与肿瘤微血管密度正向相关

4.5 食管鳞状细胞癌组织中FN和LN的表达水平与间质肌成纤维细胞数量正向相关

4.6 食管鳞状细胞癌组织中FN和LN的高表达可能参与肿瘤细胞的恶性转化并影响患者预后

5 结论

6 对于本实验中存在的局限性和异质性问题的分析和拟解决方案

参考文献

附录

致谢

综述：食管鳞状细胞癌的肿瘤血管生成机制