评价嗜麦芽窄食单胞菌灭活全菌和外膜蛋白的免疫保护作用

摘要

嗜麦芽窄食单胞菌对临床上常用的绝大多数抗菌药物耐药，如青霉素、头孢菌素、氨基糖苷类抗生素等。该菌具有高度的天然耐药性和获得耐药性，少数细菌还有NDM-1（ New Delhi metallo-β-lactamase-1）质粒，其耐药机制与外排泵、膜屏障及产生水解酶等有关[1]。随着嗜麦芽窄食单胞菌高度耐药菌株的出现，治疗嗜麦芽窄食单胞菌的感染变得越来越困难。目前国内外还没有研发出有关嗜麦芽窄食单胞菌感染的疫苗或免疫抗体，也没有发现确定的可以防护该细菌的抗原。由于灭活和减毒全细胞强劲的刺激和保护性免疫反应能力，他们已经被用于开发许多疫苗[2-4]。非发酵革兰阴性杆菌（Nonfermentative Gram-Negative Bacill， NFGNB）的外膜蛋白(outer membraneproteins,OMPs)在铜绿假单胞菌[5]和鲍曼不动杆菌[6]等多种细菌中也已经被证实具有免疫作用，可以作为防治细菌感染的重要免疫蛋白。本研究的目标是将嗜麦芽窄食单胞菌 K279a完整的灭活全细胞和部分外膜蛋白作为抗原评估其在体内和体外的免疫保护作用，进而确定该灭活全细胞和外膜蛋白是否可以作为候选疫苗，成为一种有效的防治嗜麦芽窄食单胞菌感染的方法。
　　本研究第一部分利用0.05M福尔马林溶液制备嗜麦芽窄食单胞菌灭活全细胞，经过活性检测后来免疫小鼠，免疫后小鼠抗体效价达到试验要求后，通过体外健康人血调理杀伤试验以及体内攻毒试验评价灭活全细胞的免疫保护作用。
　　本研究第二部分使用纯化的重组蛋白 ompW、Tolc-omp免疫小鼠，这两种蛋白是本课题组在前期试验中用免疫蛋白质组学方法筛选出并经过初步评价的具有免疫原性的嗜麦芽窄食单胞菌外膜蛋白，在免疫后小鼠抗体效价达到试验要求后，通过体外健康人血调理杀伤试验以及体内攻毒试验评价这两种重组抗原的免疫保护作用。
　　综上所述，本研究以嗜麦芽窄食单胞菌灭活全细胞和两种重组的外膜蛋白ompW、Tolc-omp分别作为抗原免疫小鼠，成功刺激小鼠产生免疫反应后，从体外和体内两方面来评价嗜麦芽窄食单胞菌灭活全细胞和两种重组的外膜蛋白ompW、Tolc-omp在小鼠体内的免疫保护作用，今后进一步研究出高效的、免疫保护作用强的疫苗奠定了一定的理论基础和实践基础，为预防嗜麦芽窄食单胞菌感染及相关的疾病防治提供了新的途径。

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前言

1.研究目的及意义

2.国内外研究现状及分析

3.研究内容

3.1评价嗜麦芽窄食单胞菌灭活全细胞的免疫保护作用

3.2评价嗜麦芽窄食单胞菌外膜蛋白ompW、Tolc-omp的免疫保护作用

3.3比较嗜麦芽窄食单胞菌灭活全细胞和外膜蛋白ompW、Tolc-omp这三种抗原的免疫原性

第一部分 嗜麦芽窄食单胞菌灭活全菌苗的免疫保护作用

1材料与方法

1.1实验材料

1.2实验方法

2结果

2.1筛选制备嗜麦芽窄食单胞菌全菌苗的条件

2.2嗜麦芽窄食单胞菌灭活全菌苗的活性检测

2.3血清IgG效价测定

2.4小白鼠的体外保护实验

2.5小白鼠的体内保护实验

3.讨论

第二部分 嗜麦芽窄食单胞菌外膜蛋白的免疫保护作用

1材料与方法

1.1实验材料

1.2实验方法

2结果

2.1血清IgG效价测定

2.2小白鼠的体外保护实验

2.3小白鼠的体内保护实验

3讨 论

结论

参考文献

附录

致谢

综述:鲍曼不动杆菌疫苗的分析研究