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摘要
缩略词
第一章绪论
1．1放线菌天然产物简介
1．1．1放线菌天然产物研究进展
1．1．2海洋放线菌天然产物
1．1．3放线曹天然产物的生物合成
1．1．4放线菌孤儿基因簇的激活策略
1．2 Red／ET重组工程技术在放线菌天然产物挖掘中的应用
1．2．1 Red／ET重组工程技术简介
1．2．2基于Red／ET重组工程技术的基因簇异源表达平台
1．3立题依据
1．3．1立总依据及意义
1．3．2研究内容及技术路线
第二章海洋放线菌分离及活性指导的天然产物挖掘
2．1实验材料
2．1．1实验样品
2．1．2培养基及抗生素
2．1．3实验仪器及试剂
2．1．4抗菌实验指示菌株
2．1．5 DNA合成及测序
2．2实验方法
2．2．1样品处理
2．2．2放线菌分离
2．2．3基于16S rDNA的菌株鉴定
2．2．4发酵条件初探
2．2．5发酵产物的抗菌活性测定
2．2．6产物的分离纯化及结构鉴定
2．3实验结果与分析
2．3．1基于16S rDNA的菌株鉴定
2．3．2菌株发酵粗提物的抗曹活性
2．3．3 Streptomyces sp．S42发酵粗提物的HPLC-MS分析
2．3．4 Streptomyces sp．S42发酵粗提物中活性成分的分离鉴定
2．4总结与讨论
第三章Streptomyces sp．S42中孤儿基因簇BGC14的异源表达及产物鉴定
3．1实验材料
3．1．1菌株、质粒及细胞系
3．1．2培养基、抗生素及诱导剂
3．1．3实验仪器及试剂
3．1．4 DNA合成及测序
3．2实验方法
3．2．1基因簇直接克隆
3．2．2基因簇异源表达
3．2．3基因簇的组合生物学重构
3．2．4基因敲除
3．2．5产物的分离纯化及结构鉴定
3．2．6产物的生物活性测定
3．2．7基因簇的组合生物合成
3．3实验结果与分析
3．3．1 Streptomyces sp．S42的基因组测序及BGCs分析
3．3．2 BGC14的生物信息学分析
3．3．3 BGC14的直接克隆及异源表达
3．3．4 BGC14的组合生物学重构及基因簇必要性验证
3．3．5产物的分离纯化及结构鉴定
3．3．6产物的生物活性测定
3．3．7 BGC14的生物合成途径推测
3．3．8 BGC14的组合生物合成
3．4总结与讨论
第四章Streptomyces sp．S42中其他基因簇的克隆及异源表达
4．1实验材料
4．1．1菌株及质粒
4．1．2 DNA合成
4．2实验方法
4．3．1 BGC25A的克隆及异源表达
4．3．2 BGC25B的克隆及异源表达
4．3．3 BGC17的克隆及异源表达
4．3．4 BGC21的克隆及异源表达
4．4总结与讨论
5．1总结
5．2本研究创新性分析
5．3展望
附录
参考文献
致谢
山东大学;
