左氧氟沙星对肺炎克雷伯菌肺部感染小鼠的合理用药方案研究

摘要

目的:　　 本研究通过建立肺炎克雷伯菌(klebsiella pneumoniae，Kp)肺部感染小鼠模型，测定不同剂量左氧氟沙星(levofloxacin，LVF)在其体内的药代动力学参数;体外细菌培养测定LVF对临床分离Kp菌株的最低抑菌浓度(minimum inhibitoryconcentration，MIC)和防突变浓度(mutant prevention concentration，MPC);研究LVF不同给药剂量、给药时间对Kp肺部感染小鼠的治疗作用及对耐药Kp菌株富集程度的影响，评价LVF的治疗方案、于Kp肺部感染小鼠模型中探讨并验证突变选择窗(mutant selection window，MSW)理论;筛选耐药突变Kp菌株，对耐药基因进行检测，分析Kp对LVF耐药的可能机制。　　 方法:　　 (1)Kp肺部感染小鼠LVF的药代动力学研究　　 建立Kp肺部感染小鼠模型，采用高效液相色谱法(high performance liquildchromatography，HPLC)，分别测定口服给予LVF15、30、60和90 mg/kg后不同时间，Kp肺部感染小鼠血浆、肺组织中LVF的浓度，求算Kp肺部感染小鼠的LVF的PK参数。　　 (2) Kp的体外敏感性研究　　 以铜绿假单胞菌ATCC27853作为质控菌株，采用标准琼脂平皿二倍稀释法，测定LVF对临床分离Kp菌株的MIC和MPC值。　　 (3) LVF的药效学研究　　 Kp肺部感染小鼠模型的建立及LVF给药剂量同(1)。各组小鼠采用不同剂量LVF，连续治疗7天;研究LVF给药剂量、时间对Kp肺部感染小鼠的体重、肺指数及死亡率等指标的影响。　　 (4) Kp对LVF耐药的机制研究　　 Kp肺部感染小鼠模型的建立及LVF给药剂量、时间均同(3)。筛选并培养LVF给药及停药后不同时间的耐药突变Kp菌株，采用限制片段长度多态性-聚合酶式链反应法(restriction fragment length polymorphism-polymerase chain reaction，RFLP-PCR)或PCR后直接测序的方法，检测Kp菌株耐药基因的变化。　　 结果:　　 (1) Kp肺部感染小鼠LVF的药代动力学　　 Kp肺部感染小鼠口服LVF后，各剂量组间LVF的PK参数tmax、t1/2、 CL/F、Vd/F和Ke均无显著性差异(P＞0.05); Cmax、 AUC0～24均与LVF给药剂量高度相关(P＜0.01)。　　 (2) Kp的体外敏感性研究　　 临床分离Kp菌株的MIC=0.125μg/mL，MPC=2.0μg/mL。　　 (3) LVF的药效学　　 LVF药效学考察指标主要为体重、肺指数、死亡率、Kp清除率。与模型组小鼠比较，经LVF不同剂量治疗后，Kp肺部感染小鼠的病理、生理状况均有改善;LVF给药3天后，各剂量组Kp肺部感染小鼠的体重均呈现上升趋势;LVF不同剂量治疗后，Kp肺部感染小鼠的死亡率均显著降低(P＜0.01或P＜0.05);LVF30、60和90 mg/kg剂量组治疗后，Kp肺部感染小鼠的肺指数显著降低(P＜0.01或P＜0.05);LVF60和90 mg/kg剂量组治疗后，Kp肺部感染小鼠的Kp清除率显著升高(P＜0.01或P＜0.05);　　 (4) Kp对LVF耐药的机制　　 LVF治疗后，15和90 mg/kg剂量组分离的Kp菌株突变率低;30和60 mg/kg剂量组，Kp菌株突变率升高;LVF给药及停药后不同时间，15和90 mg/kg剂量组均未检测到耐药基因gyrA、gyrB、parC和parE的突变和qnrA、qnrS和aac(6’)-Ib-cr;30和60 mg/kg剂量组，给药5天、7天及停药后1、3天，分别检测到qnrA、qnrS和aac(6’)-Ib-cr。　　 结论:　　 以Kp肺部感染小鼠为模型，LVF15 mg/kg剂量组有效率和耐药率均较低;LVF30 mg/kg剂量组，有效率低于50％而耐药率较高;LVF60 mg/kg剂量组，有效率和耐药率均较高;LVF90 mg/kg剂量组，有效率高(100％)而耐药率低(0.0％)。与MIC为基础的PK/PD参数比较，根据以MPC为基础的PK/PD参数指定给药方案，可在获得满意治疗效果的同时，降低Kp对LVF的耐药。本研究结果，为临床制定抗菌药物的合理用药方案提供了基础的依据和参考。

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摘要

英文缩略语

论文一 左氧氟沙星对肺炎克雷伯菌肺部感染小鼠的药代动力学研究

前言

材料与方法

结果

讨论

论文二 基于MPC的左氧氟沙星合理给药方案研究

前言

材料与方法

结果

讨论

论文三 肺炎克雷伯菌对左氧氟沙星耐药的分子机制研究

前言

材料与方法

结果

讨论

全文讨论

结论

本研究创新性自我评价

参考文献

综述

在学期间科研成绩

致谢

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