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摘要
文献综述
1生物防治与昆虫免疫
1．1生物防治
1．2昆虫致病菌
1．3昆虫免疫
2转录因子Relish的功能
2．1 Relsih在昆虫生理中的作用
2．2抗菌肽在昆虫免疫中的作用
3研究目的和意义
1前言
2材料与方法
2．1供试昆虫
2．2主要试剂
2．3主要仪器
2．4亚洲玉米螟幼虫总RNA提取
2．5亚洲玉米螟Of-Relish基因的3'-RACE
2．5．3实验操作步骤
2．5．4目的基因片段的回收纯化
2．5．5目的片段与克隆载体连接
2．5．6连接载体转化
2．5．7单菌落PCRj险测
2．5．8质粒抽提与测序
2．6 Of-Relish基因的5'-RACE
2．6．1 5'-RACE的模板cDNA的合成
2．6．2 5'-RACE引物设计
2．6．3实验操作步骤
2．6．4 5'-RACE产物的克隆测序
2．7序列的生物信息学分析
2．7．1亚洲玉米螟Of-Relish基因编码蛋白的理化性质分析
2．7．2亚洲玉米螟Of-Relish基因编码蛋白的结构与功能分析
2．7．3基于Of-Relish核苷酸序列推导的氨基酸序列的系统进化树构建
2．8亚洲玉米螟幼Of-Relish基因的RNAi及基因的表达水平分析
2．8．1 RNAi引物设计
2．8．2 dsRNA-Relish的制备
2．8．3亚洲玉米螟dsRNA-Relish的注射及取样
2．8．4 Real time PCR检测
2．9亚洲玉米螟Of-Relish基因及其抗菌肽基因的表达
2．9．1细菌注射亚洲玉米螟幼虫后Of-Relish基因及相关抗菌肽基因的表达水平分析
2．9．4 RNAi后再注菌时亚洲玉米螟幼虫后Of-Relish基因及相关抗菌肽基因的表达水平分析
2．9．5数据分析
3结果与分析
3．1．2 Of-Relish基因全长cDNA序列的克隆
3．2 Of-Relish基因的生物信息学分析
3．2．1 Of-Relish基因的核苷酸序列和氨基酸序列
3．2．2 Of-Relish基因的核苷酸序列和氨基酸序列的BlastP分析
3．2．3 Of-Relish基因的系统进化树
3．2．4 Of-Relish基因跨膜结构、糖基化位点、磷酸化位点以及疏水性分析
3．2．5 Of-Relish基因的三维结构及功能结构域分析
3．3．1 dsRNA-Relish合成纯度分析
3．3．2亚洲玉米螟Of-Relish基因RNAi结果分析
3．3．3亚洲玉米螟注射铜绿假单胞菌(P．aeruginosa，Pa．)以及藤黄微球菌(M．luteus，Ml．)后Of-Relish基因的表达水平分析
3．2．4亚洲玉米螟注射铜绿假单胞菌以及藤黄微球菌后Of-Relish相关抗菌肽基因的表达水平分析
3．2．5亚洲玉米螟Of-Relish基因RNAi并注射铜绿假单胞菌后Of-Relish及其相关抗菌肽的表达水平分析
3．2．6亚洲玉米螟Of-Relish基因RNAi并注射藤黄微球菌后Of-Relish及其相关抗菌肽的表达水平分析
3．4苏云金芽孢杆菌(B．thuringiensis，Bt)侵染亚洲玉米螟后Of-Relish基因及其相关抗菌肽的表达水平分析
3．4．2 Of-Relish基因及其相关抗菌肽的表达水平测定
4讨论
4．1昆虫的免疫系统
4．2 Relish基因的功能研究
4．3抗菌肽(AMPs)基因表达的应用意义
4．4亚洲玉米螟对Bt的防御反应
4．5展望
参考文献
致谢
攻读硕士学位期间发表的学术论文
扬州大学;
