声明
摘要
符号及缩略语说明
第一章文献综述
1．1土传小麦病毒病
1．1．1土传小麦病毒病的危害
1．1．2禾谷多黏菌传播的麦类病毒
1．2植物抗病毒机制
1．2．1植物先天免疫系统应对病毒侵染
1．2．2抗病毒RNA沉默及其在植物与病毒相互作用中的作用
1．3病毒突破寄主防卫的机制
1．3．1病毒编码的沉默抑制子
1．3．2病毒复制相关蛋白的对病毒致病能力有重要作用
1．3．3病毒编码的其他蛋白的对病毒致病性的影响
1．3．4 vsiRNA的致病性
1．4 TIW介导的RNA沉默的应用
1．5研究目的与意义
第二章CWMV致病因子的筛选
2．1实验材料
2．1．1植物材料
2．1．2菌株及载体
2．1．3实验试剂
2．1．4实验仪器
2．2实验方法
2．2．1植物Total RNA的提取
2．2．2反转录合成cDNA第一链
2．2．3引物设计
2．2．4目的基因的扩增
2．2．5克隆载体的构建
2．2．6沉默载体构建
2．2．7 CWMV不同地区分离物中CW1-7的功能分析
2．2．8潜在致病因子(CW1-7)的缺失突变
2．2．9潜在致病因子(CW1-7)的移码突变
2．2．10 CW1-7 P2翻译提前终止
2．2．11 Westem blot
2．3结果与分析
2．3．1 CWMV复制酶上具有致病因子序列
2．3．2 CWMV不同地区分离物中CW1-7(CR1-7)的对病毒致病性的影响
2．3．3 CR1-7是CWMV上致病相关的功能域
2．3．4 CR1-7最短有效功能域VRpep的鉴定
2．4讨论
第三章VRpep功能分析
3．1实验材料
3．1．1植物材料
3．1．2实验菌株与载体
3．1．3实验试剂
3．2．1载体构建
3．2．2农杆菌浸润烟草
3．2．5荧光定量PCR(RT-qPCR)
3．2．6 Western blot
3．2．7 Furovirus属内病毒的VRpep同源序列比对
3．2．8 VRpep保守氨基酸位点突变
3．3结果与分析
3．3．1 VRpep有助于TRV及PVX在本氏烟上的侵染
3．3．2 VRpep过表达转基因烟草对TRV及PVX的侵染的影响
3．3．3 VRpep过表达转基因烟草植株对TMV的侵染的影响
3．3．4 VRpep同源序列比对
3．3．6 Furovirus属内病毒的VRpep同源物均能增强TRV在烟草上的侵染
3．3．7 VRpep中三个连续的保守氨基酸(FLD)位点对其功能可能具有重要作用
3．4讨论
第四章VRpep致病机理初步研究
4．1实验材料
4．1．1植物材料
4．1．2实验菌株与载体
4．1．3实验试剂
4．1．4实验仪器
4．2实验方法
4．2．1表达载体构建
4．2．2 VRpep沉默抑制活性验证
4．2．3 Westem blot
4．2．4 CR1-7融合蛋白的诱导表达及与CR1-7互作蛋白的质谱分析与检测
4．3结果与分析
4．3．1 VRpep不具沉默抑制子活性
4．3．2烟草中与CR1-7潜在互作蛋白的质谱鉴定与分析
4．4讨论
第五章WYMV siRNAs在小麦根和叶片中分布具有组织特异性
5．1实验材料
5．1．1植物材料
5．1．3实验仪器
5．2生物信息学相关软件
5．3实验方法
5．3．1植物Total RNA的提取及cDNA第一链的反转录
5．3．2 PCR检测
5．3．3样品收集，小RNA高通量测序及生信分析
5．3．4 RT-qPCR
5．3．5统计分析
5．4结果与分析
5．4．1小麦根中的WYMV siRNA丰度明显高于叶片
5．4．2叶和根中的vsiRNA在病毒基因组上具有不同的分布模式
5．4．3相对于根部，叶组织的vsiRNAs的5’末端核苷酸具有明显的A／U偏好性
5．4．4 WYMV侵染对小麦根和叶中siRNA通路相关基因的表达有不同影响
5．5讨论
第六章结论与展望
6．1结论
6．2展望
参考文献
附录
致谢
攻读学位期间发表的学术论文
南京农业大学;
