桑籽发芽过程中1-脱氧野尻霉素的变化及乳汁抗蚜虫研究

摘要

桑树乳汁是一种由桑树乳汁管分泌的特殊物质。它含有蛋白质、糖、脂肪、生物碱等。桑树中的1脱氧野尻霉素（DNJ）是一种能高效抑制a–葡萄糖苷酶活性、治疗糖尿病的天然产物。它主要存在于桑叶、桑枝和桑根中，在桑树种子中也有一定量的DNJ，具有重要的研究价值。多数研究主要针对桑树的根、茎、叶等器官中的DNJ的提取与测定，但对桑树生长发育过程中DNJ含量的变化规律研究较少。本论文以桑籽作为实验材料，对桑籽到幼苗发育过程中DNJ的变化及桑树乳汁抗蚜虫的特性进行了研究分析，为桑树乳汁的形成规律以及以桑树为材料的生物抗虫研究打下基础。
　　 DNJ含量测定是采用柱前衍生化反相高效液相色谱-紫外检测法（RP-HPLC-UV）。桑籽催芽处理，在28～32℃的光照培养箱中培育，待长出两片子叶时开始分离根、茎、叶，置常温下使其干燥。以65％的乙醇为溶剂提取桑苗、桑树干种子、浸泡后的种子和刚发芽的种子中的DNJ，9-芴甲基氯甲酸甲酯（FMOCCl）
　　 为衍生剂，在pH=8.5的硼酸钾缓冲液中在20℃下进行衍生化反应20min，生成具有紫外吸收的衍生物DNJ-FMOC。以乙腈-0.1％醋酸(55：45，V/V)为流动相，流速为1.0mL／min，柱温为25℃，荧光检测器激发波长为254nm的RPHPLCUV法测定DNJFMOC含量。实验结果显示：衍生物DNJFMOC的色谱峰分离效果好，DNJFMOC的峰面积与DNJ浓度呈线性关系。RPHPLCUV法测定桑苗中DNJ含量可以作为桑树组织和相关药物中DNJ含量测定的有效方法。
　　 用RP-HPLC-UV法测定以65％的乙醇为溶剂提取的桑苗根、茎、叶、桑树干种子、浸泡后的种子和刚发芽的种子中DNJ的含量，结果发现桑树中DNJ含量有很大差异，种子中DNJ含量较高，随着种子的发育直至发芽后，DNJ含量逐渐减少，之后增加并趋于稳定。
　　 用RP-HPLC-UV法测定分别以65％的乙醇和0.05mol/LHCl为溶剂提取桑苗叶片和茎中的DNJ，结果发现用65％乙醇提取的叶片和茎中的DNJ含量均高于用0.05mol/LHCl提取的叶片和茎中DNJ含量。
　　 用徒手切片和石蜡切片法观察桑树的结构及乳汁管的分布情况，结果表明，桑树中的乳汁管是无节乳汁管，在桑树的根、茎、叶中均存在乳汁管，主要分布在皮层和韧皮部，且在各器官的分布数量有差异。
　　 采用内吸法、浸叶法、浸虫法来测定不同浓度的桑树乳汁对蚜虫的抗性作用。发现当乳汁浓度为20％时蚜虫的死亡率为最高。结果表明：桑树乳汁对蚜虫有较强的触杀作用，处理时间越长，蚜虫的死亡率越明显；桑乳汁浓度越高对蚜虫影响越大。

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1 文献综述

2 引言

3 材料与方法

4 结果与分析

5 结论

6 讨论

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