声明
主要中英文缩写
第1章 绪论
第2章 实验材料
2.1 主要仪器
2.2 质粒、菌株及细胞株
2.3 主要抗体
2.4 主要试剂盒
2.5 主要试剂
2.6其他
第3章 实验方法
3.1 pORF5融合蛋白的表达、纯化与鉴定
3.1.1 pORF5融合蛋白的表达
3.1.2 pORF5融合蛋白的纯化
3.1.3 pORF5融合蛋白Western blot鉴定
3.2 Western blot检测pORF5质粒蛋白对HMGB1表达的影响
3.2.1 HeLa细胞处理
3.2.2 pORF5质粒蛋白刺激HeLa细胞
3.2.3 收集细胞总蛋白
3.2.4 Western blot检测HMGB1蛋白的表达情况
3.3.1 细胞处理
3.3.2 JC-1荧光染色检测线粒体膜电位
3.4 pORF5质粒蛋白对细胞自噬的影响
3.4.1 HeLa细胞处理
3.4.2 Western blot检测细胞自噬情况
3.4.3间接免疫荧光法检测细胞自噬情况
3.4.4间接免疫荧光法检测Parkin蛋白转位情况
3.5 pORF5质粒蛋白对细胞凋亡的影响
3.5.1 HeLa细胞处理
3.5.2 Western blot检测细胞凋亡情况
3.5.3 间接免疫荧光法检测细胞色素c释放情况
3.6 干扰HMGB1的表达后pORF5质粒蛋白对线粒体自噬和细胞凋亡的影响
3.6.1 HMGB1基因干扰靶点慢病毒感染HeLa细胞
3.6.2 细胞处理及分组
3.6.3 Western blot检测HeLa细胞HMGB1蛋白干扰水平
3.6.3 JC-1荧光探针检测pORF5对稳定干扰HMGB1的HeLa细胞线粒体膜电位影响
3.6.4 pORF5蛋白对稳定干扰HMGB1的HeLa细胞自噬的影响
3.6.5 pORF5蛋白对稳定干扰HMGB1的HeLa细胞凋亡的影响
3.7 数据处理与统计学分析
第4章 实验结果
4.1 pORF5融合蛋白的表达、纯化与鉴定
4.1.1 pORF5融合蛋白的诱导表达
4.1.2 pORF5融合蛋白的纯化
4.1.3 pORF5融合蛋白的鉴定
4.2 pORF5质粒蛋白上调HeLa细胞HMGB1的表达
4.3 pORF5质粒蛋白减弱CCCP诱导的线粒体膜电位下降
4.4 pORF5质粒蛋白促进线粒体自噬
4.4.1 Western blot 检测pORF5质粒蛋白刺激细胞后LC3、Beclin-1 和SQSTM1/p62蛋白的表达水平
4.4.2间接免疫荧光法检测pORF5质粒蛋白刺激细胞后自噬相关蛋白LC3、SQSTM1/p62的表达情况
4.4.3 pORF5质粒蛋白诱导parkin蛋白转位至线粒体
4.5 pORF5质粒蛋白抑制HeLa细胞凋亡
4.5.1 Western blot检测pORF5质粒蛋白刺激细胞后Bax和Bcl-2蛋白的表达水平
4.5.2 间接免疫荧光法检测pORF5质粒蛋白刺激细胞后细胞色素c释放情况
4.6 pORF5质粒蛋白通过上调HMGB1的表达诱导线粒体自噬抑制细胞凋亡
4.6.1 Western blot检测HMGB1基因的干扰效果
4.6.2 JC-1荧光染色检测稳定干扰HMGB1的HeLa细胞和对照组细胞的线粒体膜电位变化情况
4.6.3 Western blot检测稳定干扰HMGB1的HeLa细胞中自噬相关蛋白和LC-3、Beclin-1和p62的表达水平
4.6.4 间接免疫荧光法检测稳定干扰HMGB1的HeLa细胞和对照组细胞自噬相关蛋白LC3、SQSTM1/p62的表达情况
4.6.5免疫荧光检测稳定干扰HMGB1后pORF5对parkin转位的影响
4.6.6 Western blot检测稳定干扰HMGB1的HeLa细胞和对照组细胞凋亡情况
4.6.7间接免疫荧光法检测稳定干扰HMGB1的HeLa细胞和对照组细胞细胞色素c释放情况
第5章 讨论
第6章 结论
参考文献
综述:沙眼衣原体抑制宿主细胞凋亡机制的研究进展
作者攻读学位期间的科研成果
本研究受以下基金资助
致谢
南华大学;
