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目 录
缩略词表
前 言
1 心房颤动
2 心房颤动与心房纤维化
3 组织因子途径抑制物 2 与纤维化相关信号通路
3.1 组织因子途径抑制物 2
3.2 组织因子途径抑制物 2 与 MAPK 信号通路
3.3 组织因子途径抑制物 2 与 TGF-β 信号通路
3.4 组织因子途径抑制物 2 与 NF-κB /MMP 信号通路
3.5 组织因子途径抑制物 2 与 Bax/Bcl-2 和 PARP 凋亡相关蛋白
第一部分 TFPI-2 对原代心房肌细胞和成纤维细胞纤维化相关表型和机制作用初探
1.1 实验材料
1.1.1 实验动物
1.1.2 实验仪器
1.1.3 实验耗材
1.1.4 实验试剂
1.1.5 试剂配制
1.2 实验方法
1.2.1 原代心房肌细胞和成纤维细胞分离
1.2.2 免疫荧光鉴定心房肌细胞和成纤维细胞
1.2.3 CCK-8 检测 TFPI-2 对两种细胞活力影响
1.2.4 流式细胞术检测 TFPI-2 对两种细胞凋亡影响
1.2.5 Transwell 检测 TFPI-2 对心房成纤维细胞迁移影响
1.2.6 Western blot 实验
1.2.7 统计学分析
1.3 实验结果
1.3.1 SD 乳鼠心房肌细胞和心房成纤维细胞鉴定
1.3.2 TFPI-2 对两种细胞活力影响
1.3.3 TFPI-2 对两种细胞凋亡影响
1.3.4 TFPI-2 对心房成纤维细胞迁移影响
1.3.5 western blot 分析
1.4 本章小结
第二部分 TFPI-2 对小鼠 HL-1 心房肌细胞和小鼠NIH/3T3成纤维细胞纤维化相关表型作用
2.1 实验材料
2.1.1 细胞系和质粒
2.1.2 实验试剂
2.2 实验方法
2.2.1 细胞培养、传代、计数、冻存与复苏
2.2.2 小鼠 HL-1 心房肌细胞系 TFPI-2 上调稳转株构建
2.2.3 MTT 实验检测TFPI-2 和TGF-β1 对HL-1 细胞和NIH/3T3 细胞增殖影响
2.2.4 流式细胞术检测TFPI-2 对HL-1 细胞和NIH/3T3 细胞凋亡影响
2.2.5 划痕实验检测TFPI-2对NIH/3T3成纤维细胞迁移影响
2.2.6 Transwell 共培养实验检测HL-1-TFPI-2细胞对NIH/3T3细胞迁移影响
2.2.7 统计学分析
2.3 实验结果
2.3.1 HL-1-TFPI-2 稳转株构建
2.3.2 TFPI-2 和 TGF-β1 对 HL-1 细胞和 NIH/3T3 细胞增殖作用相反
2.3.3 TFPI-2 对 HL-1 细胞和 NIH/3T3 细胞凋亡影响
2.3.4 TFPI-2 抑制 NIH/3T3 成纤维细胞迁移
2.3.5 Transwell 共培养 HL-1-TFPI-2 细胞抑制 NIH/3T3 细胞迁移
2.4 本章小结
第三部分 TFPI-2 抗心房纤维化机制
3.1 实验材料
3.1.1 菌种和质粒
3.1.2 实验仪器
3.1.3 实验耗材
3.1.4 实验试剂
3.1.5 试剂配制
3.2 实验方法
3.2.1 HL-1-TFPI-2 细胞培养基明胶酶谱实验检测 TFPI-2 对 MMP-9和MMP-2活性影响
3.2.2 q-RT-PCR 检测 TFPI-2 对 HL-1 心房肌细胞和 NIH/3T3 成纤维细胞促纤维化分子Collagen-I、Collagen-III、MMP-2、MMP-9和TGF-β1 mRNA转录水平影响
3.2.3 siRNA 靶向 TFPI-2 转染 HL-1 细胞和 NIH/3T3 细胞
3.2.4 双荧光素酶报告基因实验检测 TFPI-2 对MMP-9 和 MMP-2 基因启动子活性影响
3.2.5 western blot 实验
3.2.6 统计学分析
3.3 实验结果
3.3.1 TFPI-2 直接抑制 MMP-9 和 MMP-2 活性
3.3.2 TFPI-2 抑制 MMP-9 和 MMP-2 启动子转录活性
3.3.3 TFPI-2 下调促纤维化相关分子 Col-III，Col-I，MMP-9，MMP-2， TGF-β1 mRNA 转录水平
3.3.4 Western blot 分析
3.4 本章小结
讨 论
1 TFPI-2 和 TGF-β1 对细胞增殖作用相反
2 TFPI-2 对 HL-1 细胞和 NIH/3T3 细胞迁移和凋亡影响
3 TFPI-2 和 TGF-β1 对 HL-1 心房肌细胞促纤维化分子水平调节作用相反
4 TFPI-2 通过调控 MAPK 信号通路抑制成纤维细胞增殖和迁移并诱导凋亡
5 TFPI-2 抑制成纤维细胞 TGF-β1/Samds/Collagens 信号通路激活
6 TFPI-2 对 MMP-9 和 MMP-2 活性和表达的双重抑制作用
7 TFPI-2通过上调Bax/Bcl-2比率和PARP表达诱导成纤维细胞凋亡
结 论
参考文献
综述:心房颤动的细胞模型和动物模型研究进展
参考文献
附 图
个人简历
致 谢
郑州大学;
