目的: 慢性乙型肝炎是由乙型肝炎病毒(hepatitis B virus，HBV)长期感染引起的，可进展为肝纤维化、肝硬化，最终导致终末期肝病或肝细胞癌(hepatocellular carcinoma，HCC)等。肝纤维化是慢性乙肝患者肝脏疾病发展的重要中间过程。对慢性乙肝患者不同肝纤维化程度的区分诊断、监测肝纤维化进展并进行恰当的治疗可使疾病进展减缓或稳定在一定阶段，甚至趋于好转。肝穿刺活组织检查因其有创性及可能引起的并发症，不易被患者接受。肝脏瞬时弹性成像(FibroScan(@))是一种较为成熟的无创技术，通过检测肝脏硬度值评估肝纤维化程度，与病理学诊断分期有对照关系，已被列入指南。经计算得出的天门冬氨酸氨基转移酶-血小板比指数(aspartate aminotransferase-to-platelet ratio index，APRI)和基于4个因素(年龄、丙氨酸氨基转移酶(alanine aminotransferase，ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(aspartate aminotransferase，AST)、血小板计数）的纤维化指数(fibrosis index based on four factors，FIB-4)也可用于评估肝纤维化，但ALT和AST在慢性乙肝急性加重时变化剧烈，可能会对肝纤维化分期的准确性产生影响。 微小RNA(microRNA，miRNA)是一类长约22个核苷酸的单链小分子非编码RNA，主要发挥基因转录后水平调节作用。miR-34家族包含由两种不同基因编码的三个mieroRNA:miR-34a、miR-34b和miR-34c。研究证实miR-34家族是抑癌基因p53的直接靶点，其异位表达可诱导细胞凋亡和细胞周期阻滞，提示miR-34家族可能在肿瘤等相关疾病中发挥重要的抑制作用。miR-34a被认为是多种肿瘤的抑癌分子，在HBV感染、HBV相关性HCC等疾病中差异表达并发挥抑制作用，而在不同程度慢性乙肝肝纤维化患者中的表达差异仍有待探索。microRNA在血液中不易降解、检测重复性及特异性高，可作为分子水平上监测疾病进展的敏感指标。本研究检测血浆miR-34a在不同程度慢性乙肝肝纤维化患者及健康对照者中表达水平的差异，探究miR-34a对不同程度慢性乙肝肝纤维化患者的病情监测作用，并将其与APRI、FIB-4作对比分析，以发掘分子水平上更好的监测指标，或做联合监测。 方法: 1、研究对象:收集郑州大学第一附属医院感染科105例慢性乙肝患者的血浆标本作为实验组，根据FibroScan(@)检测的肝脏硬度值将不同肝纤维化程度的慢性乙肝患者进行分组，包括35例轻度肝纤维化患者（FOF1组）、35例中度肝纤维化患者（F2F3组）和35例重度肝纤维化及早期肝硬化患者(F4组)。同时期收集35名健康体检者的血浆标本作为对照组。 2、血浆miR-34a相对表达量的检测:采用实时荧光定量聚合酶链反应（quantitative real time polymerase chain reaction，qRT-PCR）检测实验组和对照组血浆标本中miR-34a的相对表达量。 3、根据研究对象的临床数据计算APRI、FIB-4的值。 4、统计学分析:采用SPSS17.0和Prism5.0统计软件进行数据的比较分析和图形绘制。运用受试者工作特征曲线(receiver operating characteristic curve，ROC)和ROC曲线下面积(area under curve，AUC)分析miR-34a、APRI和FIB-4等对慢性乙肝患者不同肝纤维化程度的诊断价值。 结果: 1、miR-34a在慢性乙肝肝纤维化患者血浆中的相对表达量与对照组相比显著下降(P＜0.001)。在不同肝纤维化程度的慢性乙肝患者中，F4组的血浆miR-34a相对表达量显著低于FOF1组(P=0.003)。 2、APRI在慢性乙肝肝纤维化患者组的计算值显著高于对照组(P＜0.001)。在不同肝纤维化程度的慢性乙肝患者中，F4组比FOF1组有更高的APRI水平(P=0.003)。 3、FIB-4在慢性乙肝肝纤维化患者组的计算值显著高于对照组（P＜0.001）。在慢性乙肝患者中，F2F3组的FIB-4水平高于FOF1组（P=0.017），F4组的FIB-4水平显著高于FOF1组（P＜0.001）。 4、ROC结果显示，血浆miR-34a、APRI和FIB-4诊断慢性乙肝患者的AUC分别为0.726(0.619-0.833)、0.978(0.959-0.997)和0.896(0.845-0.948)。血浆miR-34a、APRI和FIB-4诊断中重度肝纤维化及早期肝硬化患者的AUC分别为0.699(0.600-0.797)、0.830(0.740-0.920)和0.808(0.724-0.893)。血浆miR-34a、APRI和FIB-4诊断重度肝纤维化及早期肝硬化患者的AUC分别为0.704(0.602-0.806)、0.757(0.661-0.853)和0.769(0.672-0.866)。 5、在联合诊断慢性乙肝患者方面，miR-34a+APRI，miR-34a+FIB-4和miR-34a+APRI+FIB-4的AUC都分别大于单独用APRI或FIB-4进行诊断的AUC(0.982vs0.978,0.927vs0.896,0.983vs0.978/0.896)。而APRI+FIB-4的AUC相比于单独用APRI进行诊断的AUC并未增大(0.978vs0.978)。在联合诊断中重度肝纤维化及早期肝硬化患者方面，miR-34a+FIB-4和miR-34a+APRI+FIB-4的AUC相比于FIB-4或APRI的单独AUC增大了(0.840vs0.808，0.850vs0.830/0.808)，而APRI+FIB-4的AUC小于单独的APRI的AUC(0.815vs0.830)。在联合诊断重度肝纤维化及早期肝硬化患者方面，miR-34a+APRI，miR-34a+FIB-4和miR-34a+APRI+FIB-4的AUC都增大了(0.771vs0.757，0.797vs0.769，0.804vs0.757/0.769)，而APRI+FIB-4的AUC减小了(0.761vs0.769)。 结论: 1、miR-34a在慢性乙肝肝纤维化患者血浆中的相对表达量显著下降，且其下降程度与肝纤维化的疾病进展相关，血浆miR-34a可作为鉴别慢性乙肝患者不同肝纤维化阶段的新的候选标志物。 2、APRI和FIB-4在不同肝纤维化程度的慢性乙肝患者中显著升高，随着肝纤维化程度的加重，APRI和FIB-4均逐渐升高。 3、血浆miR-34a对慢性乙肝患者不同肝纤维化分期有诊断价值，血浆miR-34a、APRI和FIB-4的联合运用可提高对慢性乙肝肝纤维化的诊断能力。
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