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术语与缩略语表
第一章 绪论
1.1 生物粘合剂
1.2 源于新月柄杆菌的超高粘附物质 holdfast概述
1.2.1 新月柄杆菌
1.2.2 新月柄杆菌分泌物-holdfast
1.2.3 Holdfast的化学结构
1.2.4 Holdfast的生物合成
1.3 多糖脱乙酰化酶的研究现状
1.3.1 多糖脱乙酰化酶概述
1.3.2. 来源与分类
1.3.3 多糖脱乙酰化酶的结构特点
1.3.4 多糖脱乙酰化酶的底物类型及特征
1.3.5 多糖脱乙酰化酶的催化机制
1.3.6 多糖脱乙酰化酶的应用前景
1.4 研究目的及意义
第二章 新月柄杆菌多糖脱乙酰化酶基因的生物信息学分析及载体构建
2.1 实验材料
2.1.1 菌种与载体
2.1.2 实验试剂
2.1.3 实验仪器
2.1.4 培养基的配制
2.1.5 标准溶液的配制
2.2 实验方法
2.2.1 新月柄杆菌 hfsH基因功能的生物信息学分析
2.2.2 新柄杆菌 hfsH基因的序列优化
2.2.3 新月柄杆菌 hfsH基因克隆
2.2.4 PCR产物的回收
2.2.5 pET-28a(+)-hfsH重组表达载体构建流程
2.2.6 PCR回收产物和 pET-28a(+)载体的双酶切
2.2.7 连接
2.2.8 转化
2.2.9 pET-28a(+)-hfsH重组质粒提取
2.2.10 pET-28a(+)-hfsH重组质粒酶切鉴定
2.2.11 pET-28a(+)-hfsH重组质粒测序及菌种保藏
2.3 实验结果与分析
2.3.1 生物信息学分析
2.3.2 hfsH基因序列的优化及分析
2.3.3 PCR扩增产物及分析
2.3.4 酶切电泳检测结果及分析
2.3.5 pET-28a(+)-hfsH重组质粒酶切鉴定结果及分析
2.3.6 pET-28a(+)-hfsH重组质粒序列测定结果及分析
2.4 讨论
第三章 新月柄杆菌多糖脱乙酰化酶基因的表达及重组蛋白纯化
3.1 实验材料
3.1.1 菌种和质粒
3.1.2 实验试剂
3.1.3 实验仪器
3.1.4 标准溶液的配制
3.2 实验方法
3.2.1 新月柄杆菌 hfsH基因诱导表达
3.2.2 SDS-PAGE 凝胶电泳检测
3.2.3 诱导表达条件的优化
3.2.4 重组 HfsH蛋白纯化
3.2.5 蛋白浓度的测定
3.2.6 N端测序鉴定
3.3 实验结果与分析
3.3.1 大肠杆菌生长曲线
3.3.2 hfsH基因表达及条件优化结果
3.3.3 重组 HfsH蛋白的纯化结果
3.3.4 重组 HfsH蛋白 N端测序鉴定
3.3.5 重组 HfsH蛋白浓度的测定
3.4 讨论
第四章 新月柄杆菌多糖脱乙酰化酶的活性分析
4.1 实验材料
4.1.1 实验试剂
4.1.2 实验仪器
4.1.3 标准溶液的配制
4.2 实验方法
4.2.1 酶活方法的建立
4.2.2 重组 HfsH最适温度的测定
4.2.3 重组 HfsH最适 pH的测定
4.3 实验结果及分析
4.3.1 标准曲线绘制
4.3.2 活性测定结果
4.3.3 酶浓度对酶活性的影响
4.3.4 最适反应温度及分析
4.3.4 最适反应 pH及分析
4.4 讨论
第五章 全文结论
参考文献
致谢
攻读硕士期间取得的科研成果
河北大学;
