琥珀酸脱氢酶缺陷型肾细胞癌中SDHA及SDHB基因的突变检测

摘要

目的：　　探讨肾细胞癌（RCC）中琥珀酸脱氢酶亚单位A(SDHA)及亚单位B(SDHB)缺陷型病例的临床病理特征及SDHA和SDHB蛋白表达缺失与相应基因突变之间的关系。　　方法：　　采用免疫组织化学SP二步法检测179例RCC病例肿瘤组织中SDHA及SDHB蛋白的表达情况，筛选出这两种蛋白缺陷型病例，分析其临床病理特征。采用聚合酶链反应（polymerase chain reaction,PCR）扩增 SDHA及 SDHB基因外显子，DNA测序分析其突变情况并探讨其突变与蛋白表达缺陷的关系。构建SDHB野生型和突变体蛋白质三维结构，分析突变体蛋白构象。　　结果：　　（1）179例RCC中，男性109例，女性70例，年龄24岁~84岁，中位年龄57岁。肿瘤位于左肾94例（52.5%），右肾85例（47.5%）。透明细胞性肾细胞癌162例（90.5%）、乳头状肾细胞癌9例（5.0%）、嫌色性肾细胞癌5例（2.8%）、多房囊性肾细胞癌3例（1.7%）。高分化组156例（87.2%）、中分化组20例（11.2%）及低分化组3例（1.6%）。SDHA蛋白表达阳性165例（92.2%）、表达阴性1例（0.6%）及可疑阴性13例（7.2%）；SDHB蛋白表达阳性173例（96.6%）、表达阴性3例（1.7%）及可疑阴性3例（1.7%）。在不同病理分级之间SDHA表达差异有统计学意义（P＜0.05），而 SDHB表达差异无统计学意义（P＞0.05)。SDHA及SDHB蛋白表达情况在不同性别、年龄、发生部位及组织学类型间比较差异均无统计学意义（P＞0.05）。（2）SDHA及SDHB表达阴性及可疑阴性病例共18例（10.1%），其中SDHA及SDHB均为可疑阴性2例（1.1%）。18例中男性9例（50.0%），女性9例（50.0%）；年龄39岁~78岁，中位年龄55.5岁。肿瘤位于左肾12例（66.7%），右肾6例（33.3%）。透明细胞性肾细胞癌17例（94.5%）及乳头状肾细胞癌1例（5.5%）。在17例SDHA及SDHB阴性及可疑阴性的透明细胞性肾细胞癌中，1例（5.9%）伴囊性变，1例（5.9%）伴肉瘤样变。高分化组15例（83.3％）、中分化组1例（5.6％）及低分化组2例（11.1％）；高分化组更常见。大部分SDH阴性及可疑阴性RCC有以下特征：肿瘤细胞为多边形，由菲薄的纤维组织分割成巢，核内染色质呈空泡状。肿瘤内有陷入的正常肾小管，肿瘤细胞胞质内可见嗜酸性絮状物、空泡及嗜酸性包涵体。（3）18例 SDHA蛋白和（或）SDHB蛋白表达阴性和（或）可疑阴性的RCC病例，PCR均扩增成功，其中，1例存在SDHB基因外显子3点突变，1例存在SDHB基因外显子4点突变，2例存在SDHB基因外显子6点突变；均未发现SDHA基因存在突变。突变体可能引起蛋白的亲疏水性、稳定性及功能改变。18例SDHA和（或）SDHB蛋白表达阴性和（或）可疑阴性的RCC中2例获访，其中1例无肿瘤复发，1例于术后6个月死亡（原因不明）。　　结论：　　绝大多数RCC病例表达SDHA及SDHB蛋白（阳性），少数病例这两种蛋白表达阴性（缺失）或可疑阴性。SDHA蛋白和/或 SDHB蛋白表达阴性（缺失）及可疑阴性RCC有独特的组织学特征，左肾明显多于右肾。SDHA蛋白及SDHB蛋白表达阴性及可疑阴性者需进一步检测SDHA及SDHB基因的突变情况。

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英文缩略词表

0 引 言

1 材料与方法

1.1 材料

1.2 方法

2 结 果

2.1 临床病理资料

2.2免疫组织化学染色

2.3 SDHA、SDHB蛋白阴性及可疑阴性病例SDH基因的突变检测

2.4 突变检测结果分析

2.5 SDHA及SDHB阴性及可疑阴性病例突变情况分析

2.6 SDHB野生型蛋白质三维结构构建

2.7 SDHB突变体三维结构的构建及分析

2.8 随访

3 讨 论

3.1 肾细胞癌

3.2琥珀酸脱氢酶

3.3 铁硫蛋白及铁硫簇

3.4 SDH基因及其突变

3.5 SDHx突变与肿瘤形成之间的分子机制

3.6 琥珀酸脱氢酶缺陷型疾病

3.7 琥珀酸脱氢酶缺陷型肾细胞癌

4 结 论

4.1 RCC中SDHA及SDHB蛋白表达

4.2 RCC中SDHx表达缺失患者基因检测

4.3 RCC中SDHB基因突变患者SDH构象变化

参考文献

综述:肾细胞癌与琥珀酸脱氢酶缺陷

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