后备母猪重要疫病防控作用的探讨

摘要

后备母猪的培育是集约化规模猪场的重要生产环节，它直接影响全场母猪的整体生产性能，同时是猪场控制疾病的源头，及时补充优质的后备母猪，是保证规模化养殖场均匀和连续生产的基础。本研究选择广东省使用蓝耳病血清人工驯化后备母猪的某规模化猪场的7000头存栏母猪分场为对象，针对后备母猪重要疫病包括猪繁殖与呼吸障碍综合征（ Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome, PRRS ）、猪瘟（Classical swine fever, CSF）、伪狂犬病（Pseudorabies, PR）及猪流行性腹泻（Porcine epidemic diarrhea, PED）进行监控，并按批次及胎次跟踪其生产情况，结合血清学检测数据进行统计分析，探讨后备母猪重要疫病防控对生产的作用。　　本研究通过针对PRRSV Nsp9基因设计扩增引物对三份备用驯化血清进行荧光定量分析，选取病毒量达到1.0×106拷贝/μL的样品作为驯化血清，分别以1∶50、1∶80、1∶100稀释比例进行动物试验，结果显示1∶80稀释比例的试验组临床症状符合要求。2014年4月开始使用新制血清，以1∶80稀释比例对后备母猪进行驯化，3个月后对后备母猪进行蓝耳病病毒抗体检测，结果显示后备母猪蓝耳病病毒抗体离散度大幅度降低，抗体S/N值维持在1.5左右，说明在合适的活病毒量情况下使用场内流行毒株血清进行驯化可以使后备母猪的蓝耳病病毒抗体水平快速达到稳定状态。　　通过针对PRRSV ORF5基因设计扩增引物对场内发烧猪及流产母猪血清进行PCR检测，2014年至2015年期间发现15个毒株，使用DNAstar软件进行相似性分析，发现其中14个与驯化血清毒株高度相似，相似性为98.3%~99.7%，而2015年11月保育发烧猪中发现的毒株与驯化血清毒株相似性为83.7%，与驯化血清毒株有较大差异性，表明场内出现变异毒株，绘制遗传进化树分发现变异毒株是美洲型变异毒株，属于重组毒株。　　对2014年至2015年6530头后备母猪进群前进行抗原抗体血清学检测，抗原检测结果显示，后备母猪进群前PRRSV、CSFV、PEDV等重要疫病病原阴性。猪伪狂犬病毒gE抗体、猪伪狂犬病毒gB抗体、猪瘟病毒抗体逐头检测，蓝耳病病毒抗体每批抽检20至30头，结果显示猪伪狂犬病毒gE抗体阴性率100%、猪伪狂犬病毒gB抗体阳性率98.22%、猪瘟病毒抗体阳性率97.53%、蓝耳病病毒抗体阳性率98.09%。　　结合血清学检测数据及生产数据分析发现，蓝耳病不稳定及变异毒株感染对生产造成影响，主要表现为母猪0胎次淘汰率升高、窝产不合格仔数增加及整体成活率下降。PRRSV变异毒株还会造成不同妊娠时期母猪出现集中流产。而蓝耳病毒抗体稳定，猪瘟病毒抗体水平高且均匀的母猪终生提供合格仔猪数更多。对于蓝耳病毒抗体S/P值＜0.4，猪瘟病毒抗体阻断率低于40的后备猪要严格进行淘汰。　　重要疫病的防控是减少后备母猪过早淘汰的根本，本次研究利用血清学数据结合实际生产进行统计分析，可以为规模化猪场后备母猪重要疫病的防控提供临床数据。

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1 绪论

1.1 猪繁殖与呼吸障碍综合征

1.1.1 PRRSV的流行病学

1.1.2 PRRS的临床症状

1.1.3 PRRS的诊断

1.1.4 PRRS的免疫

1.2 猪瘟

1.2.1 我国猪瘟的流行状况

1.2.2 猪瘟的诊断

1.2.3 猪瘟的防控

1.3 伪狂犬

1.3.1 我国猪群伪狂犬病的流行情况

1.3.2 伪狂犬病的诊断

1.3.3 伪狂犬病的防控

1.4 猪流行性腹泻

1.4.1 PED的流行情况

1.4.2 PED的诊断

1.4.3 PED的防控

1.5免疫计划

1.6 后备母猪的隔离培育

1.6.1 隔离培育舍的准备

1.6.2 温度管理

1.6.3 通风管理

1.8 驱虫及保健

1.9 后备母猪的淘汰

1.9.1 主动淘汰

1.9.2 被动淘汰

1.10 血清学分析的应用

1.11 生物安全

1.12 研究对象及目的

1.12.1 后备猪批次管理规程

1.12.2 血清驯化

1.12.3 检测

2.1 材料

2.1.1 样品

2.1.2 酶类及相关试剂

2.1.3 其他主要试剂

2.1.4 主要仪器和设备

2.2 方法

2.2.1 引物设计与合成

2.2.2 病毒总RNA的提取

2.2.3 反转录

2.2.4 病毒的PCR鉴定

2.2.5 PCR产物的回收和纯化

2.2.6 PCR纯化产物与载体连接

2.2.7 连接产物转化DH5α感受态细胞

2.2.8 重组质粒的菌液PCR鉴定

2.2.9 阳性菌液保存和质粒的提取

2.2.10 基因序列分析

2.2.11 实时荧光定量PCR检测标准品的制备

2.2.12 实时荧光定量PCR标准曲线的建立

2.2.13 实时荧光定量PCR的熔解曲线分析

2.2.14 荧光定量敏感性试验

2.2.15 荧光定量特异性试验

2.2.16 动物试验

2.2.17 猪繁殖与呼吸综合征病毒抗体的检测

2.2.18 猪瘟病毒抗体检测

2.2.19 猪伪狂犬病毒gE抗体检测

2.2.20 猪伪狂犬病毒gB抗体检测

3 结果

3.1 备用攻毒血清病毒RT-PCR检测结果

3.2 攻毒血清病毒含量检测结果

3.3 动物试验结果

3.4 猪场PRRSV-ORF5基因跟踪检测结果

3.5 2015年11月发烧保育猪血清PRRSV-ORF5基因分析结果

3.6 后备母猪抗原检测结果

3.7 后备母猪抗体ELISA检测结果

3.8 后备母猪抗体水平与第一胎生产力的相关性

3.9 后备母猪抗体水平与淘汰率的关系

3.10 场内PRRS状态对猪场产仔的影响

3.11 场内PRRS状态对全场成活率的影响

3.12 母猪群繁殖情况

3.13 场内PRRS状态对后备母猪各胎次产仔的影响

3.14 后备母猪各胎次窝产仔情况

3.15 后备母猪高产阶段年度对比结果

3.16 全场母猪生产性能年度对比

4 讨论

4.1 驯化血清的使用

4.2 药物保健与预防

4.3 饲养管理

4.4 环境控制

4.5 生物安全

4.6 血清学检测与分析在生产中的重要性

5 全文总结