2016-2017年珠三角马立克氏病流行病学调查

摘要

马立克氏病（Marek's disease，MD）是鸡的一种高度传染性、淋巴细胞增生性疾病。过去数十年来，MD一直在我国鸡群中流行，马立克氏病野毒株的致病性似有逐渐增强的趋势，CVI988/Rispens疫苗已广泛应用于我国养禽业MD的防控。2016-2017年期间，广东省珠三角地区不少养禽场报告疑似MD病例。本研究拟开展该时期内珠三角地区MD流行病学调查，并通过羽毛囊中CVI988/Rispens疫苗拷贝数来分析其免疫效果，以期为本地区MD的防控提供参考。　　本研究通过临床剖检﹑病理组织学、病毒分离鉴定和间接免疫荧光试验（IFA）等对5个疑似MD病例进行流行病学调查；并对分离到的6株马立克氏病病毒（MDV）进行鉴定，分别将它们命名为HD1D、HD7E、HZM01、HZQ03、HZY04和HZS03M毒株；PCR鉴定这6株MDV分离株，均能扩增到pp38片段（873bp）、Meq片段（1200bp）和vIL-8片段（886bp）等，提示这6株分离株均为Ⅰ型MDV。基于MDV血清Ⅰ型特异性单克隆抗体BA4和H19的IFA鉴定结果表明：HD1D、HD7E、HZM01、HZQ03和HZY04分离株均为致病性Ⅰ型MDV。　　为进一步了解各MDV分离株主要致病相关基因的遗传衍化特点，本研究对各分离株的Meq、pp38和vIL-8序列进行了PCR扩增和克隆测序，序列分析结果表明：HD1D、HZM01、HZQ03和HZY04 分离株Meq基因编码的氨基酸序列在K77E、D80Y、V115A、T139A、P176R、P217A等位点与国内MDV超强毒株（GX0101等）出现一致的突变，与国外vv+MDV（584A等）在第217（P-A）位出现一样的突变，在176位点都有突变但是碱基不同；HD1D、HZQ03、HZM01、HZY04 和 HD7E 分离株在pp38基因编码的氨基酸序列中第107位与国内外vvMDV（Md5、GX0101等）都是谷氨酰胺（Q），在109位与CVI988/Rispens疫苗株同为甘氨酸（G）；HZM01、HZQ03和HZY04分离株vIL-8基因编码的氨基酸序列在C38R、L110P和D123G位点出现了与 GX0101 株相同的点突变。基于 Meq、pp38 和 vIL-8 基因的遗传进化树分析表明HZS03M分离株与CVI988/Rispens同源性为100%；分离株HD7E与814毒株同源性为 100%；其中 4 株（HD1D、HZM01、HZQ03 和 HZY04）分离株与国内超强毒株（GX0101等）在同一分支上。由此可推测HD1D、HZM01、HZQ03和HZY04分离株应为vMDV或vvMDV。　　为调查鸡群免疫CVI988/Rispens疫苗后的效果，本研究通过疫苗株Q-PCR方法检测华南地区不同黄羽鸡场（包括A、B、C、D、E、F、G、H、I、J和K场）共1031份羽毛囊组织样品中CVI988/Rispens的复制量。结果发现无论是14日龄还是21日龄羽毛囊样品，不同场之间CVI988/Rispens的平均复制量存在差异或显著差异(P＜0.05），尤其是在不同品系之间，差异极显著(P＜0.001 ）；说明不同场或不同品系之间CVI988/Rispens的平均复制量存在着参差不齐的现象。基于野毒株Q-PCR方法对565份21日龄羽毛囊样品MDV野毒株的检出率为0，但同样方法对24份MD病鸡的羽毛囊进行检测，其中有 79.17%（19/24）的样品能检测到野毒株的有效复制。结果提示14-21日龄羽毛囊样品适于CVI988/Rispens疫苗株复制量的监测；而送检的这565份羽毛囊样品没有检测到MDV野毒株。　　本研究结果表明，广东省珠三角地区有 MDV 强毒株的流行，鸡场应切实做好MD的防控工作，尤其应实时监测CVI988/Rispens疫苗的免疫效果。

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