HSP90AB1与CC结构域相互作用对Bcr--Abl细胞定位及功能的影响

目录

英汉缩略语名词对照

前言

第一部分 Bcr-Abl CC结构域特异结合蛋白的筛选与验证

1 材料与方法

1.1主要试剂与材料

1.2主要仪器设备

1.3 细胞培养

1.4 目的基因穿梭载体的构建

1.5 CC结构域互作蛋白的筛选

1.6 免疫共沉淀技术检测蛋白互作关系

1.7 Western blot检测蛋白水平表达

1.8 重组腺病毒的转染及效率的鉴定

2.实验结果

2.1免疫共沉淀发现与CC结构域特异结合的蛋白

2.2 CC结构域互作蛋白的分析与筛选

2.3 Bcr-Abl CC域与HSP90AB1蛋白互作的验证

2.4 Bcr-Abl与HSP90AB1蛋白互作位点的预测分析

2.5 HSP90AB1与HSP90AB1-ΔNTD表达载体的鉴定

2.6 CC结构域与HSP90AB1蛋白互作位点的验证

3.讨论

第二部分 HSP90AB1与CC结构域互作对Bcr-Abl亚细胞定位的影响

1 材料与方法

1.1主要试剂与材料

1.2主要仪器设备

1.3 细胞培养

1.4 CCK-8实验检测药物对细胞增殖的影响

1.5 免疫荧光观察蛋白定位及细胞核形态学变化

2.实验结果

2.1 HSP90AB1抑制剂17AAG处理浓度及时间的筛选

2.2 免疫荧光观察Bcr-Abl与HSP90AB1发生解离后的核质定位

2.3 蛋白免疫印迹检测Bcr-Abl与HSP90AB1发生解离后的核质定位

3.讨论

第三部分 Bcr-Abl与HSP90AB1发生解离后入核并发挥促凋亡作用

1 材料与方法

1.1主要试剂与材料

1.2主要仪器设备

1.3 细胞集落形成实验检测细胞增殖能力

1.4 流式细胞术检测细胞凋亡及周期

1.5 数据统计学分析

2.实验结果

2.1 Bcr-Abl蛋白的核定位诱导CML细胞正常凋亡

2.2 Bcr-Abl入核后诱导CML细胞凋亡的具体机制

2.3 HSP90AB1抑制剂17AAG与蛋白核输出抑制剂LMB联用抑制CML细胞的促增殖能力

2.4 HSP90AB1抑制剂17AAG与蛋白核输出抑制剂LMB联用抑制CML细胞的抗凋亡能力

3.讨论

全文总结

参考文献

文献综述:功能蛋白亚细胞定位与肿瘤发病机制关系的研究进展

致谢

攻读学位期间的科研成果和发表的学术论文