羧基苍术苷、苍术苷含量测定新方法及转化规律研究

摘要

目的:(1)建立反相离子对高效液相色谱法同时测定苍耳子中羧基苍术苷和苍术苷的含量，解决现行分析方法杂质干扰大，部分样品没有达到基线分离的缺陷。(2)建立含苍耳子中成药的供试品溶液的高效富集纯化方法，应用反相离子对色谱法，测定中成药中主要毒性成分苍术苷的含量。(3)建立液质联用方法(UPLC-MS/MS)同时测定中成药中羧基苍术苷和苍术苷的含量，为含苍耳子类中成药的安全性评价提供质量控制方法。(4)探究苍耳子煎煮过程中羧基苍术苷和苍术苷的动态变化规律，为含苍耳子类中成药生产及其过程控制提供参考。　　方法:(1)采用高效液相色谱法，以Agilent Eclipse XDB-C18（250 mm×4.6 mm，5.0μm）为色谱柱;流动相为乙腈-0.15％磷酸二氢钠溶液（含0.12％四丁基氢氧化铵，磷酸调pH至3.5）(39:61);检测波长为203 nm。(2)中成药样品用水超声处理，水提液分别上D101型大孔树脂柱和WAX固相萃取小柱除杂并富集纯化苍术苷，制备供试品溶液。(3)应用Agilent1290型超高液相色谱仪串联Agilent6460型三重四极杆质谱仪，采用电喷雾(ESI)离子源，多反应离子检测（MRM）负离子，羧基苍术苷、苍术苷、氯霉素内标的定量分析离子分别为m/z769.1→688.8、725.0→644.9、320.8→151.7。(4)采用反相离子对色谱法，考察煎煮时间对苍耳子水煎液中羧基苍术苷、苍术苷含量的影响。　　结果:(1)所建立的反相离子对色谱法，羧基苍术苷、苍术苷进样量分别在0.15～3.7μg（r=0.9999）和0.10～2.5μg(r=1.000)范围呈良好的线性关系，平均回收率分别为101.4％(RSD1.7％)、101.6％(RSD1.2％)。(2)所建立的中成药供试品溶液的制备方法，除去了大部分杂质干扰，且富集了苍术苷的浓度，平均回收率为95.7％(RSD1.2％)，采用上述反相离子对色谱法测得5种中成药中苍术苷含量分别为226.3、464.6、386.1、66.0、1044.7μg·g-1。(3)所建立的UPLC-MS/MS法，羧基苍术苷、苍术苷进样量分别在9.73～973 ng·mL-1、50.5～4040 ng·mL-1范围内线性关系良好，平均回收率分别为98.9％(RSD4.3％)、102.4％(RSD3.8％)，测定了8种中成药中羧基苍术苷和苍术苷的含量。(4)生苍耳子水煎煮2h内，羧基苍术苷、苍术苷含量均迅速升高，此阶段以溶出为主，2h后苍术苷含量继续升高，而羧基苍术苷则持续降低，此阶段以羧基苍术苷转化为苍术苷为主;炒苍耳子不含羧基苍术苷，水煎液中苍术苷含量持续升高，2h内迅速增加，2h后缓慢上升并趋于平稳，提示苍术苷较稳定。　　结论:(1)反相离子对色谱法显著地改善了羧基苍术和苍术苷的分离效果，可同时测定二者的含量，方法简便可行。(2)D101型大孔树脂和WAX固相萃取小柱联用可高效除杂并富集苍术苷，适用于复杂样品的前处理制备供试品溶液。(3)中成药中羧基苍术苷和苍术苷含量差异很大，可采用UPLC-MS/MS法同时测定二者的含量，为含苍耳子类中成药的安全性评价提供质控方法。(4)生苍耳子应先煎或久煎，使羧基苍术转化为苍术苷，降低毒性。

目录

摘要

前言

第一章 苍耳子中羧基苍术苷、苍术苷含量测定新方法研究

1．1 仪器与试药

1．1．1 仪器

1．1．2 样品及试药

1．2 方法与结果

1．2．1 色谱条件

1．2．2 对照品、供试品溶液的制备

1．2．3 线性关系考察

1．2．4 检测限与定量限

1．2．5 精密度实验

1．2．6 稳定性实验

1．2．7 重复性试验

1．2．8 回收率实验

1．2．9 含量测定

1．3 讨论

1．3．1 流动相pH

1．3．2 离子对试剂浓度

1．3．3 耐用性考察

1．3．4 不同方法的比较

第二章 HPLC法测定中成药中苍术苷的含量

2．1 仪器、材料及试药

2．1．1 仪器及材料

2．1．2 试药

2．2 方法与结果

2．2．1 色谱条件

2．2．2 溶液的制备

2．2．3 线性关系考察

2．2．4 精密度实验

2．2．5 稳定性实验

2．2．6 重复性实验

2．2．7 回收率实验

2．2．8 含量测定

2．3 讨论

2．3．1 大孔树脂及洗脱条件

2．3．2 固相萃取小柱

2．3．3 色谱分析方法

第三章 UPLC-MS／MS同时测定中成药中羧基苍术苷和苍术苷的含量

3．1 仪器与试药

3．1．1 仪器

3．1．2 试药与试剂

3．2 方法与结果

3．2．1 色谱及质谱条件

3．2．2 溶液的制备

3．2．3 线性关系考察

3．2．4 精密度实验

3．2．5 稳定性实验

3．2．6 重复性实验

3．2．7 回收率实验

3．2．8 含量测定

3．3 讨论

3．3．1 液质联用方法建立的目的及依据

3．3．2 结果讨论

第四章 苍耳子煎煮过程中毒性成分变化规律研究

4．1 仪器与试药

4．1．1 仪器

4．1．2 试药

4．2 方法与结果

4．2．1 色谱条件

4．2．2 溶液的制备

4．2．3 线性关系的考察

4．2．4 检测限与定量限

4．2．5 精密度实验

4．2．6 稳定性实验

4．2．7 重复性试验

4．2．8 回收率实验

4．3 含量测定结果

4．3．1 水煎供试品中毒性成分与回流时间的关系

4．3．2 超声供试品中毒性成分与回流时间的关系

4．4 讨论

4．4．1 煎煮对毒性成分含量的影响

4．4．2 色谱条件的优化

4．4．3 文献研究与讨论

参考文献

苍耳子化学成分及水溶性苷类毒性成分含量测定概况 综述

致谢

攻读硕士期间公开发表的学术论文、专著及科研成果

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