三氧化二砷对MRL/lpr狼疮鼠脾脏淋巴细胞组蛋白酰化的影响

摘要

目的：
　　 1．探讨三氧化二砷对MRL/lpr狼疮鼠脾脏淋巴细胞组蛋白H3乙酰化水平的影响。
　　 2．探讨三氧化二砷对组蛋白乙酰化转移酶(HATs)和组蛋白去乙酰化酶(HDACs)活性的影响。
　　 方法：
　　 1．小鼠脾脏淋巴细胞培养与实验分组
　　 将20周龄MRL/lpr狼疮鼠和正常C57BL/6J小鼠无菌条件下取出脾脏，制配成脾脏淋巴细胞悬液。体外经PHA-p(20μg/ml)和IL-2(1000IU/ml)常规刺激48h后，随机分为3组：(1)ATO组；(2)曲古抑菌素(TrichostatinA，TSA)组；(3)RPMI1640组，继续培养24h。
　　 2．组蛋白提取与Western印迹分析
　　 采用酸抽提法提取组蛋白。Western印迹法检测乙酰化组蛋白H3的表达量。
　　 3．核蛋白提取与HAT和HDAC活性测定
　　 提取小鼠脾脏淋巴细胞核蛋白。比色分析组蛋白去乙酰化酶活性试剂盒测定脾脏淋巴细胞核蛋白HDAC活性。比色分析组蛋白乙酰化转移酶活性试剂盒测定脾脏淋巴细胞核蛋白HAT活性。
　　 结果：
　　 1．MRL/lpr狼疮鼠中RPMI1640组、ATO组、TSA组组蛋白H3乙酰化水平分别为0.46±0.06、0.87±0.02、1.6±0.13(n=3)，且差异具有显著的统计学意义(P＜0.01)；
　　 2．MRL/lpr狼疮鼠中RPMI1640组、ATO组、TSA组HDAC活性分别为(23.73±5.28)μmol/L、(14.47±2.89)μmol/L、(11.83±2.10)μmol/L，表明ATO和TSA能明显降低HDAC活性，P值分别为0.001、0.000(n=6);
　　 3．MRL/lpr狼疮鼠中RPMI1640组、ATO组、TSA组HAT活性分别为(1.34±0.49)μmol/L、(1.38±0.60)μmol/L、(1.24±0.35)μmol/L，三组间两两相比差异无统计学意义，以上分别为P＞0.05(n=6);
　　 4．以C57BL/6J空白对照组(RPMI1640)HDAC/HAT的比值作为样品校正，其值设置为100％(100％±26％)。则MRL/lpr狼疮鼠RPMI1640组、ATO组、TSA组HDAC/HAT的比值分别为444％±81％、282％±101％、240％±66％。ATO组与TSA组HDAC/HAT的比值均低于RPMI1640组，P分别为0.004和0.001（n=6）：
　　 5．C57BL/6J小鼠中，ATO组和RPMI1640组之间以上指标均无差异(组蛋白乙酰化水平：依次为0.71±0.09、0.75±0.04，P=0.489;HDAC:(16.55±3.68)μmol/L、(17.72±3.92)μmol/L，P=0.550;HAT:(4.29±0.99)μmol/L、(4.36.±1.00)μmol/L,P=0.931;HDAC/HAT:94％±23％、100％±26％,P=0.569)。
　　 结论：
　　 1．ATO能提高组蛋白H3的乙酰化水平；
　　 2．ATO能明显抑制MRL/lpr狼疮鼠脾脏淋巴细胞HDAC活性，对HAT无明显影响作用；
　　 3．ATO能下调HDAC/HAT的比值；
　　 4．ATO对C57BL/6J正常小鼠乙酰化的组蛋白H3、HDAC活性、HAT活性无明显影响作用。