嗜麦芽窄食单胞菌整合子介导的获得性耐药机制研究以及联合用药体外研究

摘要

目的：　　了解嗜麦芽窄食单胞菌的临床感染特点和耐药特征,为临床治疗嗜麦芽窄食单胞菌感染提供帮助。检测该菌中整合子及耐药基因盒的存在情况,以研究整合子与嗜麦芽窄食单胞菌耐药之间的关系。　　应用联合药敏试验,研究头孢他啶、左氧氟沙星和磺胺甲基异噁唑/甲氧苄啶之间两两联合应用的体外抗菌效应。并且进一步体外研究磺胺甲基异噁唑/甲氧苄啶单用和联用左氧氟沙星后对嗜麦芽窄食单胞菌的防耐药突变浓度和耐药突变选择窗的变化情况,为防止嗜麦芽窄食单胞菌耐药的产生提供理论依据。　　方法：　　收集安徽医科大学第一附属医院2007-2011年间的425株嗜麦芽窄食单胞菌,对其临床感染特点进行总结分析,包括感染病例的年度分布、年龄及性别分布、科室分布和标本来源分布。挑取其中的83株嗜麦芽窄食单胞菌,采用CLSI推荐的琼脂倍比稀释法测定6种抗菌药物对这83株菌株的最低抑菌浓度;聚合酶链反应扩增这83株菌株的qacE△1-sul1基因、IntⅠ、IntⅡ、IntⅢ及1类整合子可变区。应用联合药敏试验测定头孢他啶、左氧氟沙星和磺胺甲基异噁唑/甲氧苄啶之间两两联合应用对敏感菌株的体外抗菌效应,利用部分抑菌浓度指数这一指标评价三对联合方式的协同效应。采用琼脂平板倍比稀释法测定磺胺甲基异噁唑/甲氧苄啶单用及联合使用左氧氟沙星对10株嗜麦芽窄食单胞菌临床分离株的防耐药突变浓度。　　结果：　　嗜麦芽窄食单胞菌的感染呈上升趋势。最多见于呼吸道感染,425株嗜麦芽窄食单胞菌主要来源于痰及咽拭子,占78.12％;其临床主要分布于呼吸科和重症监护室,分别占18.27%和15.38%;嗜麦芽窄食单胞菌感染病例以男性居多,大部分是老年人,年龄在60岁及以上的占63.47%。　　83株嗜麦芽窄食单胞菌对头孢他啶、替卡西林/克拉维酸的耐药率较高,分别是63.8%、75.9%,对磺胺甲噁唑/甲氧苄啶的耐药率为48.2%。在这83株菌株中,检出18株qacE△1-sul1基因阳性株,20株IntⅠ阳性株,1类整合子可变区检出3类基因盒,aacA4-catB8-aadA1、aac(6’)-Ⅱ-blaCARB-8和aar-3-dfrA27基因盒,首次在SMA中发现aar-3-dfrA27基因盒,GenBank登录号为KC748137。　　联合药敏结果显示三种药物联合方式都表现出有协同效应,未出现拮抗作用。磺胺甲噁唑/甲氧苄啶联合头孢他啶、左氧氟沙星联合头孢他啶比磺胺甲噁唑/甲氧苄啶联合左氧氟沙星表现出更好的协同作用。　　磺胺甲噁唑/甲氧苄啶单用对嗜麦芽窄食单胞菌的MPC值大部分都≥152/8μg/mL,其MPC/MIC值在2到32之间。联用2μg/mL的左氧氟沙星后,磺胺甲噁唑/甲氧苄啶对其中9株的MPC值均有所下降,大部分的MPC/MIC值都下降了2倍。　　结论：　　嗜麦芽窄食单胞菌已成为医院感染的重要致病菌,本次研究的嗜麦芽窄食单胞菌耐药情况严重,临床上应加强预防高危因素,在药敏试验结果指导下合理使用抗菌药物。SMA对磺胺甲噁唑/甲氧苄啶的耐药性增加可能与1类整合子有关,整合子的存在加快了细菌耐药的传播。　　临床上嗜麦芽窄食单胞菌的感染可以考虑联合用药,以达到更好的临床治疗效果。临床上磺胺甲噁唑/甲氧苄啶常规剂量单用治疗SMA感染,可能导致SMA耐药突变,而联合左氧氟沙星可以降低磺胺甲噁唑/甲氧苄啶对SMA的MPC值,缩小MSW,减少嗜麦芽窄食单胞菌耐药突变株的产生。

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第一部分正文嗜麦芽窄食单胞菌整合子介导的获得性耐药机制研究

1 前言

2 材料与方法

3 结果

4 讨论

5 结论

参考文献

第二部分正文嗜麦芽窄食单胞菌的抗菌药物联合应用体外研究

1 前言

2 材料与方法

3 结果

4 讨论

5 结论

参考文献

附录

研 究 工 作

致谢

综述

参考文献