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缩略语
第一章 文献综述
1 体细胞杂交技术的研究进展
1.1 原生质体的来源
1.2 融合方法
1.3 融合方式
1.4 体细胞杂种的鉴定
1.5 植物体细胞杂种的核基因组组成
1.6 目标性状转移
1.7 体细胞杂交技术在药用植物中的研究进展
2 植物次生代谢研究进展
2.1 次生代谢产物种类及作用
2.2 药用植物的次生代谢途径酶基因
3 萜类研究进展
3.1 萜类代谢途径
3.2 萜类代谢途径中的主要酶及其基因
3.3 植物细胞色素P450
3.4 单萜类代谢途径
3.5 萜类代谢工程
4 川西獐牙菜的研究进展
4.1 獐牙菜苦苷和龙胆苦苷的药用作用
4.2 环烯醚萜类化合物的化学分类
4.3 獐牙菜苦苷和龙胆苦苷的生物合成途径
5 研究背景及立题意义
第二章 川西獐牙菜体细胞杂交
1 材料与方法
1.1 川西獐牙菜和狭叶柴胡的原生质体融合
1.2 同工酶分析
1.3 DNA提取
1.4 RAPD分析
1.5 染色体制片及观察
1.6 GISH分析
1.7 高效液相色谱(HPLC)
1.8 醇溶性可挥发成分的GC-MS分析
1.9 RNA提取及纯化
1.10 逆转录合成一链cDNA
1.11 常规PCR
1.12 目的片段的回收和连接
1.13 大肠杆菌感受态的制备(CaCl2法)和转化
1.14 质粒的提取和酶切
1.15 引物设计
2 结果与分析
2.1 融合产物的生长发育
2.2 融合再生愈伤组织的杂种鉴定
2.3 狭叶柴胡与川西獐牙菜体细胞杂种核基因组组成
2.4 亲本与杂种中相关药效成分含量的HPLC分析
2.5 亲本与杂种中化学成分的GC-MS分析
2.6 细胞色素P450基因在体细胞杂种及其双亲中的存在方式
3 讨论
3.1 高寒减药材-川西獐牙菜体细胞杂交研究
3.2 体细胞杂种中异源染色质组成及其与UV剂量、药效成分含量的关系
3.3 利用体细胞杂交技术实现藏药材药效成分的转移
3.4 杂种中SmG10H基因表达与獐牙菜苦苷含量的关系
第三章 环烯醚萜类化合物相关基因的克隆和功能验证
1 材料与方法
1.15'RACE和3'RACE扩增基因全长
1.2 原核表达载体的构建和表达分析
1.3 真核表达载体的构建和表达分析
1.4 植物过表达和RNAi载体的构建和表达分析
1.5 蛋白纯化
1.6 等电聚集
1.7 酶活力检测
1.8 Southern杂交
1.9 Real-time PCR
1.10 序列分析
1.11 半定量RT-PCR
2 结果与分析
2.1 SmG10H基因全长的克隆
2.2 SmG10H基因在基因组中的分布
2.3 SmG10H基因在川西獐牙菜不同器官中的表达
2.4 茉莉酸甲酯对川西獐牙菜环烯醚萜合成相关基因表达及其药效成分含量的影响
2.5 SmG10H基因的原核大肠杆菌表达分析
2.6 SmG10H基因在真核酵母中的表达
2.7 SmG10H基因在植物中的表达
3 讨论
3.1 川西獐牙菜药效成分獐牙菜苦苷代谢途径及其关键酶基因SmG10H的发掘
3.2 SmG10H基因克隆及酶催化性质分析
3.3 SmG10H在川两獐牙菜中的器官特异性表达研究
3.4 MeJA对环烯醚萜类化合物合成相关基因表达及其药效成分含量的影响
3.5 环烯醚萜类化合物合成关键酶基因--SmG10H表达对转基因植株药效成分含量的影响
附表
论文创新点
参考文献
研究生期间发表论文情况
致谢