咬合创伤对大鼠颞下颌关节髁突软骨及软骨下骨改建的影响

摘要

实验目的:
　　通过建立大鼠咬合创伤模型，观察咬合创伤刺激因素去除前后大鼠颞下颌关节关节髁突软骨及软骨下骨的组织学变化，以探讨咬合创伤刺激因素去除前后髁突软骨及软骨下骨的改建变化过程，为探索咬合创伤相应的临床治疗提供理论依据。
　　实验方法:
　　选取45只8周龄雄性Wistar大鼠（体重180g-220g），随机分为、咬合创伤组（实验A组）、去除咬合创伤后休息2周组（实验B组）和对照组（C组），每组15只。采用（牙合）面高度为1.0mm铸造钴铬合金3/4冠，粘结固定于大鼠右侧下颌第一磨牙建立大鼠的咬合创伤模型。实验A组分别于戴冠后1周、2周、4周三个时间点处死，分组为A1组、A2组、A3组，每组5只;实验B组分别于戴冠1周、2周、4周后拆冠，并分别于拆冠休息2周后三个时间点处死，分组为B1组、B2组、B3组，每组5只;对照组:不作任何处理，同环境饲养，于相应周数即1周、2周、3周、4周、6周五个时间点处死，分组为C1组、C2组、C3组、C4组、C5组、C6组，每组3只。
　　在各实验点，通过心脏灌注处死大鼠，取大鼠右侧颞下颌关节作为标本，经石蜡包埋后制备5μm的正中矢状位连续切片。作HE染色和马松三色染色行咬合创伤下颞下颌关节改建的形态学观察;通过碱性磷酸酶(ALP)免疫组织化学染色观察成骨细胞数量、分布和细胞活性;通过抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色和组织蛋白酶K(CK)免疫组织化学染色观察破骨细胞数量、分布及活性。使用Image Pro Plus6.0软件计算CK、ALP免疫组化染色的平均光密度值并对随机视野内TRAP阳性细胞计数。
　　统计分析:通过Graphpad Prism6.0统计软件进行相应的数据统计分析，组间对比通过单因素方差分析和非配对t检验，判断有无统计学差异。当p＜0.05时，认为差异有统计学意义。
　　实验结果:
　　(1)大鼠咬合创伤动物模型的建立:
　　铸造冠稳定性良好，能够对wistar大鼠牙周组织造成明显的病理性损伤，成功建立咬合创伤模型，实验组大鼠与对照组相比性情急躁，饮食减少。
　　(2) HE染色观察:
　　对照组:各层细胞排列整齐，界限清晰，随着实验时间的延长，髁突软骨呈现增龄性变化，表现为软骨厚度逐渐变薄，软骨厚度与大鼠周龄成负相关。
　　实验组:实验A组中A1组，A2组，A3组大鼠的髁突软骨厚度与同龄对照组均有明显变薄(P＜0.05)，出现明显的退行性变，软骨分层模糊，细胞排列紊乱，髁突软骨表面纤维束剥脱，局部细胞成簇。实验B组中B1组、B2组与对照组无明显差异，B3组存在分层模糊、细胞排列紊乱，髁突软骨厚度变薄，且有统计学意义（P＜0.05）。
　　(3)马松三色染色观察:
　　对照组:松质骨结构规则，矿化的成熟松质骨（红色）及未矿化完全的新骨（蓝色）均存在，矿化的成熟松质骨比例更大。
　　实验组:实验A组可观察到不规则，错乱的松质骨结构，三个时间点非成熟骨（蓝色）所占比例（COL/TV）均明显高于对照组(P＜0.05)，软骨下骨中出现较大的髓腔。实验B组邻近软骨染成蓝色的未矿化的松质骨显著增加。
　　(4) ALP免疫组织化学染色观察:
　　对照组:ALP呈弱阳性表达，主要定位于软骨下骨小梁。
　　实验组:实验A组和实验B组ALP表达与同龄对照组相比均呈现出明显增多的趋势(P＜0.01)。
　　(5)TRAP染色和CK免疫组织化学染色观察:
　　对照组:软骨下骨TRAP阳性细胞分布较少，偶可见CK表达阳性的破骨细胞。
　　实验组:实验A组和实验B组中TRAP阳性细胞和CK阳性细胞数量均较同龄对照组多，且差异均有统计学意义(P＜0.05)，实验A组破骨细胞增多量更加明显。
　　结论:
　　(1)通过粘结铸造冠的方式可以建立稳定可靠的大鼠早接触咬合创伤模型，可用于进行咬合创伤的研究。
　　(2)咬合创伤可以导致大鼠髁突软骨出现退行性改变，且这种组织学变化程度随咬合创伤时间的延长更加明显，同时也伴有一定的增殖反应。
　　(3)髁突有一定的改建能力，去除咬合局部刺激因素，颞下颌髁突软骨及软骨下骨形态将趋于正常，提示临床上应多关注患者咬合，及时去除咬合创伤。

目录

声明

摘要

符号说明

前言

材料与方法

1．1 实验动物的选择和分组

1．2 实验试剂

1．3 实验仪器及耗材

1．4 实验试剂配制

1．5 实验方法

2．1 咬合创伤大鼠动物模型的建立

2．3 马松三色染色结果显示

2．4 ALP免疫组织化学染色显示

讨论

3．1 实验动物的选择

3．2 建立咬合创伤模型方法的选择

3．3 咬合创伤对髁突改建影响

结论

附图表

参考文献

发表文章及参与课题

致谢