1.芪丹中药提取物对缺血—再灌注离体大鼠心脏的保护作用及机制研究;2.反式白藜芦醇和反式三甲基白藜芦醇对豚鼠心室肌细胞钠电流的影响

摘要

第一部分芪丹中药提取物对缺血—再灌注离体大鼠心脏的保护作用及机制研究 芪丹中药提取物(QDPTP)是按照中医理论组方、经现代工艺提取加工而成的中药复方提取物。该方以黄芪为君药，丹参、川芎和红花为臣药，银杏叶、三七和红景天为佐使药。本实验采用Langendorff灌流的离体大鼠心脏，研究QDPTP的抗缺血再灌注(I/R)损伤作用及可能的作用机制，为该药的开发研究提供实验依据。 一、QDPTP对I/R后左室发展压(LVDP)、冠脉流量(CF)和恶性心律失常发生率的影响 本实验采用离体大鼠心脏平衡、全心缺血(停灌)和再灌注各30min。设立4个组：QDPTP高、低(900mg/kg和450mg/kg)剂量组，(缺血再灌注)模型对照组和正常灌流组。连续监测心电图，观察恶性心律失常的发生情况，定时测量CF和LVDP。 结果：QDPTP高、低剂量组均可抑制I/R引起的LVDP和CF的下降，降低恶性心律失常的发生率，且高剂量组具统计学意义(P＜0.05)。 二、QDPTP对大鼠心肌SOD活力和MDA含量的影响 灌流方法和实验分组同上。实验结束后取左室心肌约150mg，制成匀浆，同批测定SOD活力(黄嘌呤氧化酶法)和MDA含量(硫代巴比妥酸法)。结果：QDPTP低、高剂量组均可显著提高心肌SOD活力和降低MDA含量(P＜0.01)，但没有明显的量效关系。 三、QDPTP对心肌细胞凋亡和凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax表达的影响 灌流方法和实验分组同上。实验结束后迅速取少量心尖部组织，经多聚甲醛固定，常规石蜡包埋、切片。心肌细胞凋亡按末端脱氧核苷酸转移酶(TdT)介导的dUTP缺口末端标记法(TUNEL)标记凋亡细胞核的3'末端。凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax的表达按试剂盒说明书免疫组化染色法(SABC法)检测。结果：QDPTP降低凋亡发生率(P＜0.05)，剂量依赖性地降低Bax蛋白的表达、增加Bcl-2蛋白的表达。 四、QDPTP对再灌后心肌超微结构的影响 灌流方法和实验分组同上。实验结束后迅速取左室心肌约1mm3，经戊二醛固定，电镜检测超微结构的变化。结果：QDPTP高剂量组心肌超微结构的损伤较模型对照组明显减轻。 第二部分反式白藜芦醇和反式3，5，4'-三甲基白藜芦醇对豚鼠心室肌细胞钠电流的影响 反式白藜芦醇(RES)是一多酚化合物，化学名为3,5,4'-三羟基-反式-二苯乙烯(3，5，4'-trihydroxy-trans-stilbene)。研究证实，RES具有心血管保护作用，包括抗氧化、抑制血小板聚集、增加eNOS和nNOS的表达并提高其活性、舒张血管、抑制血管紧张素Ⅱ引起的心肌细胞肥大、抑制血管紧张素Ⅱ和内皮素引起的血管平滑肌细胞增殖、抗心律失常等作用。也有报道RES对豚鼠心室肌细胞钙电流的快速抑制作用。 3,5,4'-三甲氧基-反式-二苯乙烯(3,5,4'-trimethoxy-trans-stilbene，TMS)是RES的甲基化衍生物，已证明其有抗血管增殖、抗炎抗过敏、抗肿瘤等作用，且优于RES，尚未见TMS对心肌细胞电生理特性影响的报道。鉴于TMS可能更具应用前景，我们合成了TMS。本研究探讨了RES和TMS对豚鼠心室肌细胞INa的影响。 一、RES对豚鼠心室肌细胞INa的影响 采用酶解法制备单个心室肌细胞。应用全细胞膜片钳记录方法，在电压钳制下记录心室肌细胞INa。结果表明，RES(10，30，100μmol·L-1)浓度依赖性的抑制豚鼠心室肌细胞INa，其中30μM对INa的抑制率为14.5±1.5％(P＜0.005)，100μM对其抑制率为56.6±7.9％(P＜0.001)，抑制作用迅速，用药后3分钟左右即开始起效，洗脱后均可以完全恢复；RES不改变INa的最大激活电压；100μM使半数最大失活电压(V1/2)由-89.3±2.0mV变化到-100.7±3.3mV(P＜0.005)，未改变S和半数最大激活电压(V1/2)。 二、TMS对豚鼠心室肌细胞INa的影响 方法同上。结果表明，TMS(10μmol·L-1)可快速抑制豚鼠心室肌细胞INa，用药后3分钟左右即开始起效，10分钟时抑制率为36.8±5.6％(P＜0.005)，洗脱后可完全恢复；1、3μmol·L-1TMS不影响INa大小。TMS不改变INa的最大激活电压。10μM使半数最大失活电压(V1/2)由-87.0±3.3mV变化到-96.7±3.5mV(P＜0.001)，使失活S由4.9±0.3mV变化到5.4±0.3mV(P＜0.01)；使半数最大激活电压(V1/2)由-38.9±1.4mV变化到-47.3±1.3mV(P＜0.001)，未改变激活S。 综上所述，可以得出以下结论：(1)QDPTP对I/R引起的心肌损伤有明显的拮抗作用，其机制可能与其保护内源性抗氧化酶，清除自由基，抑制膜脂质过氧化，抗细胞凋亡等有关；(2)RES浓度依赖性的抑制INa，TMS也可抑制INa，作用出现快，提示二者均有心肌保护作用，其作用与快速抑制INa有关，而且TMS对INa抑制作用强于RES。

目录

缩略语

摘要

前 言

第一部分芪丹中药提取物对缺血－再灌注离体大鼠心脏的保护作用及机制研究

第二部分反式白藜芦醇和反式3，5，4'-三甲基白藜芦醇对豚鼠心室肌细胞钠电流的影响

全文小结

综述

攻读硕士期间已发表的论文及参加的会议

致谢