格列喹酮血药浓度测定及其分散片的人体生物等效性研究

摘要

目的：格列喹酮(Gliquidone)是第二代磺酰脲类口服降血糖药。本课题旨在建立健康人血浆中格列喹酮的液相色谱-质谱(LC-MS/MS)测定方法，并进行格列喹酮片（糖适平）与格列喹酮分散片在中国健康受试者体内的药代动力学和生物等效性研究。
　　方法：以北京万辉双鹤药业有限责任公司生产的格列喹酮片（糖适平）做参比制剂，采用两制剂双周期随机交叉试验设计，研究格列喹酮分散片的生物等效性。20例健康男性受试者空腹口服单剂量格列喹酮受试制剂或参比制剂30 mg，于给药前和给药后0-24 h内按设计的时间点采集血样。血浆样品中加入格列本脲为内标，采用沉淀蛋白法进行处理，在Capcell PAK MG C18（50×4.6 mm I.D.，5μm）分析柱和C18（4×3.0 mm I.D.,5μm）保护柱上进行分离，以乙腈-水-甲酸=67:33:0.1为流动相，流速为0.80 ml/min；待测物采用串联四级杆质谱，在电喷雾电离源（ESI）负离子模式下进行多反应监测（MRM），用于定量分析的离子反应分别为m/z526.2?m/z401.2（格列喹酮）和m/z492.1?m/z367.1（格列本脲），分析方法经充分验证后用于样品测定。所得血药浓度数据用 DAS2.1.1软件进行统计学分析，受试制剂和参比制剂的Tmax用Wilcoxon非参数秩和检验进行统计学处理，Cmax和AUC经对数转换后进行方差分析，用双向单侧t-检验和[1-2α]置信区间法进行生物等效性评价。
　　结果：在5.00-1000 ng·ml-1范围内，格列喹酮血浆浓度与峰面积具有良好线性关系，定量下限为5.00 ng·ml-1，典型回归方程为：Y=0.0365X-0.00257(r=0.9992，n=7)。低、中、高3个浓度质控样品（格列喹酮血浆浓度分别为10.0，100和800 ng·ml-1）的日内RSD分别为7.2％、3.8%和3.3%，日间RSD分别为10.0%、7.0%和9.5%，准确度分别为97.5%、99.9%和100.4%，提取回收率分别为（73.5±5.0）%、（84.8%±2.3）%和（81.7±4.4）%，内标的提取回收率为（93.2±6.0）%。格列喹酮低、高浓度下的基质效应分别为94.7%和103.8%，相对标准差小于7.5%，内标的基质效应分别为109.2%和105.6%，相对标准差小于4.2%。格列喹酮血浆样品室温放置6h、经历三次冻?融循环以及-70℃放置56天；均稳定；处理后样品置自动进样器内放置22 h稳定。
　　按两制剂双周期交叉实验设计，19名健康受试者口服30 mg格列喹酮参比制剂或受试制剂，其主要药动学参数 Cmax分别为(773.1±224.1) ng·ml-1和(668.5±213.6)ng·ml-1；Tmax分别为(3.3±1.6) h和(3.1±1.0) h；AUC0-t分别为(4853.0±1600.7) ng·ml-1·h和(4428.8±1335.7) ng·ml-1·h；AUC0-∞分别为(5501.9±1903.0) ng·ml-1·h和(5227.6±2473.9) ng·ml-1·h；t1/2分别为(8.9±7.2) h和(11.9±25.1) h。Tmax非参数秩和检验后结果显示：受试制剂与参比制剂差异无统计学意义（P>0.05）；Cmax、AUC0-t、AUC0-∞经对数转换后做方差分析，受试制剂与参比制剂差异均无统计学意义（P>0.05）。双向单侧t检验结果表明，格列喹酮受试制剂与参比制剂AUC0-t几何均值比的90%置信区间为88.0%～96.0%，在80%～125%范围内；Cmax几何均值比的90%置信区间为78.0%～94.4%，不在80%～125%范围内；以AUC0-t计算，受试制剂相对于参比制剂的生物利用度为(92.5±10.5)%。
　　结论：本文建立的血浆中格列喹酮的LC-MS/MS定量分析方法专属性好，灵敏度高，精密准确，稳定可靠，适用于格列喹酮分散片在健康人体中的药代动力学和生物等效性的研究。
　　根据2015年《中国药典》的生物等效性判断标准，本研究测定的受试制剂格列喹酮分散片与参比制剂格列喹酮片（糖适平）生物不等效。

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引言

第一部分格列喹酮血药浓度测定方法的建立及验证

前言

材料与方法

结果

附图

附表

讨论

小结

参考文献

第二部分格列喹酮分散片的人体生物等效性

前言

材料与方法

结果

附图

附表

讨论

小结

参考文献

结论

综述: 格列喹酮的药理特点及临床应用情况综述

致谢

个人简历